CST, 5562S, Kit PTMScan® de motivo remanente de ubiquitina (K-épsilon-GG)

PTMScan para estudiar en el área de investigación. Información de uso del producto Las células se lisan en un tampón con urea, las proteínas celulares se digieren mediante proteasas y los péptidos resultantes se purifican mediante extracción en fase sólida en fase reversa. A continuación, los péptidos se someten a purificación por inmunoafinidad utilizando un anticuerpo PTMScan® Motif conjugado con perlas de agarosa de proteína A. Los péptidos no unidos se eliminan mediante lavado y los péptidos capturados que contienen PTM se eluyen con ácido diluido. La purificación en fase reversa se realiza en micropuntas para desalinizar y separar los péptidos del anticuerpo antes de concentrar los péptidos enriquecidos para su análisis por LC-MS/MS. CST recomienda el uso del tampón PTMScan® IAP n.° 9993, incluido en el kit. El kit PTMScan ® Ubiquitin Remnant Motif (K-epsilon-GG) tiene una versión de microesferas magnéticas de mayor sensibilidad y especificidad: el kit PTMScan ® HS Ubiquitin/SUMO Remnant Motif (K-epsilon-GG) en formatos de 10 ensayos (n.° 59322) o 3 ensayos (n.° 19089), así como un formato de solo microesferas (n.° 34608). Almacenamiento Las perlas de anticuerpo se suministran en tampón IAP con 50 % de glicerol. Conservar a -20 °C. No alicuotar el anticuerpo. Protocolo Protocolos disponibles: PTMScan Fondo La ubiquitina es una unidad polipeptídica conservada que desempeña un papel importante en la vía ubiquitina-proteasoma. La ubiquitina puede unirse covalentemente a muchas proteínas celulares mediante el proceso de ubiquitinación, que dirige las proteínas para su degradación por el proteasoma 26S. Tres componentes intervienen en el proceso de conjugación proteína diana-ubiquitina. La ubiquitina se activa primero mediante la formación de un complejo tioléster con el componente de activación E1; la ubiquitina activada se transfiere posteriormente a la proteína transportadora de ubiquitina E2, y luego de E2 a la ubiquitina ligasa E3 para su entrega final al épsilon-NH2 del residuo de lisina de la proteína diana (2-4). La vía ubiquitina-proteasoma se ha implicado en una amplia gama de procesos biológicos normales y en anomalías relacionadas con enfermedades. Se ha demostrado que varias proteínas, como IβB, p53, cdc25a y bcl-2, son dianas del proceso ubiquitina-proteasoma, como parte de la regulación de la progresión del ciclo celular, la diferenciación, la respuesta al estrés celular y la apoptosis (5-8). En este ensayo, el conjugado de microesferas de anticuerpo PTMScan con motivo remanente de ubiquitina (K-ε-GG), un anticuerpo patentado contra la rama de ubiquitina ("K-ε-GG") con especificidad para una etiqueta de di-glicina, que es el remanente de ubiquitina que queda en los sustratos proteicos tras la digestión con tripsina, se utiliza para enriquecer los péptidos ubiquitinados de muestras celulares digeridas con tripsina. Este enriquecimiento se completa con un análisis LC-MS/MS para obtener perfiles cuantitativos de cientos a más de mil secuencias ubiquitinadas no redundantes. Nombres alternativos motivo; PTMScan; ub; ubiquitina; ubiscan