CST, 5563S, Kit de anticuerpo monoclonal 2 con motivo de sustrato PTMScan® Phospho-Akt (RXRXXS*/T*)

PTMScan para estudiar en el área de investigación. Información de uso del producto Las células se lisan en un tampón con urea, las proteínas celulares se digieren mediante proteasas y los péptidos resultantes se purifican mediante extracción en fase sólida en fase reversa. A continuación, los péptidos se someten a purificación por inmunoafinidad utilizando un anticuerpo PTMScan® Motif conjugado con perlas de agarosa de proteína A. Los péptidos no unidos se eliminan mediante lavado y los péptidos capturados que contienen PTM se eluyen con ácido diluido. La purificación en fase reversa se realiza en micropuntas para desalinizar y separar los péptidos del anticuerpo antes de concentrar los péptidos enriquecidos para su análisis por LC-MS/MS. CST recomienda el uso del tampón PTMScan® IAP n.° 9993, incluido en el kit. Almacenamiento Las perlas de anticuerpo se suministran en tampón IAP con 50 % de glicerol. Conservar a -20 °C. No alicuotar el anticuerpo. Protocolo Protocolos disponibles: PTMScan Fondo Akt desempeña un papel central en la mediación de respuestas celulares críticas, como el crecimiento y la supervivencia celular, la angiogénesis y la regulación transcripcional (2-4). Pertenece a una importante clase de quinasas, conocidas como quinasas dirigidas por Arg o quinasas de la familia AGC, que incluyen la proteína quinasa dependiente de AMPc (PKA), la proteína quinasa dependiente de GMPc (PKG), la proteína quinasa C, Akt, la quinasa p70S6 y la RSK. Estas quinasas comparten una especificidad de sustrato caracterizada por la presencia de Arg en la posición -3 con respecto a la Ser o Thr fosforiladas (5,6). Akt, la quinasa p70 S6 y RSK comparten además especificidad por Arg en la posición -5 (secuencia de reconocimiento RXRXXS/T) (7). En un reciente estudio fosfoproteómico (8), coautorado por científicos del CST Site Discovery Group, se identificaron más de 300 sustratos posteriores para las quinasas de la familia AGC que reconocen el motivo RXRXXS/T mediante la tecnología PhosphoScan utilizando anticuerpos de sustrato Phospho-Akt. Estos anticuerpos CST™ son herramientas potentes para investigar la regulación de la fosforilación por Akt y otras quinasas dirigidas por Arg, así como para el descubrimiento de fármacos quinasos de alto rendimiento. En este ensayo, PTMScan (RXRXXS Nombres alternativos Akt; akt1; akt2; akt3; motivo