CST, 5564S, Kit de sustrato con motivo de fosfo-AMPK PTMScan® (LXRXXS*/T*)

PTMScan para estudiar en el área de investigación. Información de uso del producto Las células se lisan en un tampón con urea, las proteínas celulares se digieren mediante proteasas y los péptidos resultantes se purifican mediante extracción en fase sólida en fase reversa. A continuación, los péptidos se someten a purificación por inmunoafinidad utilizando un anticuerpo PTMScan® Motif conjugado con perlas de agarosa de proteína A. Los péptidos no unidos se eliminan mediante lavado y los péptidos capturados que contienen PTM se eluyen con ácido diluido. La purificación en fase reversa se realiza en micropuntas para desalinizar y separar los péptidos del anticuerpo antes de concentrar los péptidos enriquecidos para su análisis por LC-MS/MS. CST recomienda el uso del tampón PTMScan® IAP n.° 9993, incluido en el kit. Almacenamiento Las perlas de anticuerpo se suministran en tampón IAP con 50 % de glicerol. Conservar a -20 °C. No alicuotar el anticuerpo. Protocolo Protocolos disponibles: PTMScan Fondo La proteína quinasa activada por AMP (AMPK) se conserva en gran medida desde la levadura hasta las plantas y los animales, y desempeña un papel clave en la regulación de la homeostasis energética (2). Esta quinasa se activa por una relación AMP/ATP elevada debido al estrés celular y ambiental, como el choque térmico, la hipoxia y la isquemia (2). Se han identificado varias mutaciones en las subunidades de AMPKγ, la mayoría de las cuales se localizan en los supuestos sitios de unión de AMP/ATP (dominios CBS o Bateman). Las mutaciones en estos sitios provocan una reducción de la actividad de AMPK y la acumulación de glucógeno en el corazón o el músculo esquelético (2,3). Cada vez hay más evidencia que indica que AMPK no solo regula el metabolismo de los ácidos grasos y el glucógeno, sino que también modula la síntesis de proteínas y el crecimiento celular a través de las vías EF2 y TSC2/mTOR, así como el flujo sanguíneo a través de eNOS/nNOS (2). AMPK Substrate Motif (LXRXXS) Nombres alternativos AMPK; AMPKa; AMPK alfa; AMPKa; AMPKalfa; motivo; pampk