CST, 59524S, PTMScan® Control Peptides Phospho-Enrichment IMAC

Extractos celulares para estudio en el área de investigación. Información de uso del producto Úselo con el protocolo del kit de perlas magnéticas Fe-NTA IMAC de enriquecimiento de fosfo-péptidos PTMScan® de Cell Signaling Technology n.° 20432 desde el paso de incubación. Dado que la cantidad óptima de IMAC de enriquecimiento de fosfo-péptidos PTMScan® para los experimentos de cada usuario dependerá de factores únicos, como la sensibilidad del espectrómetro de masas, los usuarios pueden diluir estos péptidos de control según sea necesario en el disolvente adecuado. 1. Divida en alícuotas el IMAC de enriquecimiento de fosfo-péptidos PTMScan® para su almacenamiento como unidades de un solo uso a -20 °C o proceda a su uso inmediato. 2. Realice una digestión secundaria con tripsina de los péptidos de muestra en el tampón y volumen adecuados durante dos horas a 37 °C, por ejemplo, 50 µL de tampón con acetonitrilo al 5 %, bicarbonato de amonio 50 mM y 100 ng/µL de tripsina. 3. Añada 0,95 mL de tampón de carga (ácido trifluoroacético al 0,1 %, acetonitrilo al 85 %) a la solución digerida y agite en vórtex. 4. Aclare los péptidos de muestra mediante centrifugación. 5. Transfiera los péptidos de muestra clarificados a tubos con perlas magnéticas IMAC lavadas. 6. Añada 10 µL de PTMScan® Control Peptides Phospho-Enrichment IMAC a los tubos con perlas y péptidos de muestra y mezcle bien. 7. Continúe con el flujo de trabajo de IMAC en el paso de incubación de 30 minutos. 8. Detecte PTMScan® Control Peptides Phospho-Enrichment IMAC en el archivo de datos de LCMS. Almacenamiento Este producto es estable durante 24 meses si se almacena a -20 °C. Separe el contenido para evitar múltiples ciclos de congelación y descongelación. Fondo La cromatografía de afinidad de metales inmovilizados, o IMAC, se ha utilizado ampliamente para enriquecer proteínas y péptidos de muestras biológicas mediante la unión a grupos de carga negativa. Los iones metálicos de transición divalentes Co , Cu , Ni y Zn se utilizan a menudo para purificar proteínas ricas en polihistidina o cisteína, así como proteínas con afinidad por metales. Los iones metálicos trivalentes, Fe , Ga , Al , así como Ti y Zr se utilizan comúnmente para el enriquecimiento de fosfopéptidos para estudios proteómicos (1). El ácido iminodiacético (IDA) o el ácido nitrilotriacético (NTA) se utilizan para quelar los iones metálicos a perlas recubiertas de agarosa. En estudios de comparación, se ha demostrado que el NTA tiene un mejor rendimiento que el IDA en la captura selectiva e identificación de más fosfopéptidos. Ga y Fe son comparables con respecto al número de fosfopéptidos identificados (2). En comparación con la cromatografía de afinidad por óxido metálico (MOAC) con TiO, la cromatografía de afinidad por Fe mostró un rendimiento ligeramente superior, con una preferencia del TiO por fosfopéptidos ácidos (pI > 4) en comparación con el Fe, que prefirió péptidos menos ácidos (pI < 4) (3). Las perlas magnéticas Fe-NTA IMAC de enriquecimiento por fosfopéptidos PTMScan n.° 20432 ofrecen una herramienta eficiente para el enriquecimiento de fosfopéptidos con poco o ningún sesgo en el contexto de residuos de fósforo. Pueden emplearse de forma independiente o junto con el enriquecimiento por inmunoafinidad para complementar cualquier estudio proteómico LC-MS/MS con PTMScan.