CST, 61231T, anticuerpo monoclonal de conejo fosfo-B-Raf (Ser365) (F6P2S)

Anticuerpo monoclonal para el estudio del fosfato de B-Raf (Ser365). Validado para Western Blot, Western Simple™ e inmunoprecipitación. Disponible en dos tamaños. Altamente específico y rigurosamente validado internamente, el anticuerpo monoclonal de conejo Phospho-B-Raf (Ser365) (F6P2S) (CST n.° 61231) está listo para su envío. Información de uso del producto Western Blot: 1:1000 Western Simple™: 1:10 - 1:50 Inmunoprecipitación: 1:50 Almacenamiento Se suministra en 10 mM de HEPES sódico (pH 7,5), 150 mM de NaCl, 100 µg/mL de BSA, 50 % de glicerol y menos del 0,02 % de azida sódica. Conservar a -20 °C. No alicuotar el anticuerpo. Protocolo Protocolos disponibles: Western Blot, Inmunoprecipitación Especificidad / Sensibilidad El anticuerpo monoclonal de conejo Fosfo-B-Raf (Ser365) (F6P2S) reconoce los niveles endógenos de la proteína B-Raf solo cuando está fosforilada en Ser365. Este anticuerpo no presenta reacción cruzada con la B-Raf fosforilada en Ser363, Ser364 o Ser446, ni con la c-Raf fosforilada en Ser259. Este anticuerpo detecta una proteína de 70 kDa de identidad desconocida en algunas líneas celulares. Reactividad de las especies: humano, ratón, rata Fuente / Purificación El anticuerpo monoclonal se produce inmunizando animales con un fosfopéptido sintético correspondiente a los residuos que rodean a Ser365 de la proteína B-Raf humana. Fondo A-Raf, B-Raf y c-Raf (Raf-1) son los principales efectores reclutados por Ras unido a GTP para activar la vía de la quinasa MEK-MAP (1). La activación de c-Raf es la mejor comprendida e implica la fosforilación en múltiples sitios de activación, incluyendo Ser338, Tyr341, Thr491, Ser494, Ser497 y Ser499 (2). Se ha demostrado que la quinasa activada por p21 (PAK) fosforila c-Raf en Ser338, y la familia Src fosforila Tyr341 para inducir la actividad de c-Raf (3,4). Ser338 de c-Raf corresponde a sitios similares en A-Raf (Ser299) y B-Raf (Ser446), aunque este sitio está constitutivamente fosforilado en B-Raf (5). Los sitios de unión inhibitorios 14-3-3 en c-Raf (Ser259 y Ser621) pueden ser fosforilados por Akt y AMPK, respectivamente (6,7). Si bien A-Raf, B-Raf y c-Raf son similares en secuencia y función, se ha observado una regulación diferencial (8). De particular interés, B-Raf contiene tres sitios de fosforilación de Akt de consenso (Ser365, Ser429 y Thr440) y carece de un sitio equivalente a Tyr341 de c-Raf (8,9). Estudios de investigación han demostrado que la mutación V600E de B-Raf resulta en una actividad quinasa elevada y se encuentra comúnmente en el melanoma maligno (10). Seis residuos de c-Raf (Ser29, Ser43, Ser289, Ser296, Ser301 y Ser642) se hiperfosforilan de una manera consistente con la inactivación de c-Raf. La hiperfosforilación de estos seis sitios depende de la señalización MEK aguas abajo y hace que c-Raf no responda a eventos de activación posteriores (11). La fosforilación de B-Raf en Ser365 por la proteína quinasa A tiene un efecto inhibidor en la vía de señalización RAS-RAF-MEK-ERK, similar a la fosforilación de c-Raf en Ser259 (12, 13). La fosforilación de B-Raf Ser365 inducida por forskolina crea un sitio de acoplamiento para las proteínas reguladoras 14-3-3, que bloquea competitivamente la unión de NRas a B-Raf, inhibiendo la activación de MEK y ERK aguas abajo (12). El sitio de acoplamiento 14-3-3 puede ser alterado in vitro mediante la mutación de Ser365 a alanina (12,13). La introducción de la mutación Ser365Ala en las líneas celulares B-Raf V600E promovió la autodimerización de B-Raf, lo que resultó en una menor sensibilidad al inhibidor de Raf PLX4720, una activación prolongada de MEK/ERK y una proliferación sostenida (13). Nombres alternativos Proteína B-raf de 94 kDa; B-raf; protooncogén B-Raf, serina/treonina-proteína quinasa (p94); protooncogén B-Raf, serina/treonina quinasa; serina/treonina-proteína B-Raf; B-RAF1; BRAF; BRAF1; FLJ95109; MGC126806; MGC138284; homólogo B1 del oncogén viral del sarcoma murino (v-raf); NS7; p94; protooncogén B-Raf; RAFB1; serina/treonina-proteína quinasa B-raf; homólogo B del oncogén viral del sarcoma murino v-raf; homólogo B1 del oncogén viral del sarcoma murino v-Raf Especificación REACTIVIDAD: HMR SENSIBILIDAD: Endógena Peso molecular (kDa): 86-96 Fuente/Isotipo: IgG de conejo