CST, 6292S, SignalSilence® PLK1 siRNA I

ARNi para estudiar PLK1 en el área de investigación. Información de uso del producto CST recomienda la transfección con 100 nM de SignalSilence® PLK1 siRNA I de 48 a 72 horas antes de la lisis celular. Para el procedimiento de transfección, siga el protocolo proporcionado por el fabricante del reactivo de transfección. No dude en contactar con CST si tiene alguna pregunta sobre su uso. Cada vial contiene el equivalente a 100 transfecciones, lo que corresponde a una concentración final de siRNA de 100 nM por transfección en una placa de 24 pocillos con un volumen total de 300 µl por pocillo. Almacenamiento El ARNi SignalSilence® se suministra en agua libre de ARNasa. Separar y almacenar a -20 °C. Fondo Existen al menos cuatro quinasas tipo polo distintas en células de mamíferos: PLK1, PLK2, PLK3 y PLK4/SAK (1). Al parecer, la PLK1 desempeña diversas funciones durante la mitosis, en particular en la regulación de la entrada y salida mitótica. El factor promotor de mitosis (MPF), cdc2/ciclina B1, se activa mediante la desfosforilación de cdc2 (Thr14/Tyr15) por cdc25C. La PLK1 fosforila cdc25C en Ser198 y ciclina B1 en Ser133, lo que provoca la translocación de estas proteínas del citoplasma al núcleo (2-5). Se ha propuesto que la fosforilación de Myt1 por PLK1 en Ser426 y Thr495 inactiva Myt1, una de las quinasas que fosforilan cdc2 en Thr14/Tyr15 (6). Las quinasas tipo Polo también fosforilan la subunidad de cohesina SCC1, lo que provoca el desplazamiento de la cohesina de los brazos cromosómicos, lo que permite su correcta localización en los centrómeros (7). La salida mitótica requiere la activación del complejo promotor de anafase (APC) (8), una ubiquitina ligasa responsable de la eliminación de la cohesina en los centrómeros y la degradación de securina, ciclina A, ciclina B1, Aurora A y cdc20 (9). Se ha demostrado la fosforilación de las subunidades Apc1, cdc16 y cdc27 del APC por parte de PLK1 y se ha propuesto como un mecanismo regulador de la salida mitótica (10,11). Se ha descrito que la sustitución de Thr210 por Asp eleva la actividad de la quinasa PLK1 y retrasa/detiene la mitosis celular, mientras que la sustitución de Ser137Asp provoca la detención de la fase S (12). Además, si bien se ha descubierto que el daño al ADN inhibe la actividad de la quinasa PLK1, el mutante Thr210Asp es resistente a esta inhibición (13). Se ha informado que PLK1 se fosforila en Ser137 y Thr210 durante la mitosis; el daño al ADN impide la fosforilación en estos sitios (14). Especificación REACTIVIDAD: H