CST, 6574S, SignalSilence® PKA C-alfa siRNA II

ARNi para el estudio de PKA C-alfa en el área de investigación. Información de uso del producto CST recomienda la transfección con 100 nM de SignalSilence® PKA C-alfa siRNA II entre 48 y 72 horas antes de la lisis celular. Para el procedimiento de transfección, siga el protocolo proporcionado por el fabricante del reactivo de transfección. No dude en contactar con CST si tiene alguna pregunta sobre su uso. Cada vial contiene el equivalente a 100 transfecciones, lo que corresponde a una concentración final de siRNA de 100 nM por transfección en una placa de 24 pocillos con un volumen total de 300 µl por pocillo. Almacenamiento El ARNi SignalSilence® se suministra en agua sin ARNasa. Separar y almacenar a -20 °C. Fondo El segundo mensajero AMP cíclico (cAMP) activa la proteína quinasa dependiente de cAMP (PKA o cAPK) en células de mamíferos y controla muchos mecanismos celulares como la transcripción génica, el transporte iónico y la fosforilación de proteínas (1). La PKA inactiva es un heterotetrámero compuesto por un dímero de subunidad reguladora (R) y un dímero de subunidad catalítica (C). En este estado inactivo, las secuencias de pseudosustrato en las subunidades R bloquean los sitios activos en las subunidades C. Se han identificado tres isoformas de la subunidad C (C-α, C-β y C-γ) y dos familias de subunidades reguladoras (RI y RII) con distintas propiedades de unión a cAMP. Las dos familias R existen en dos isoformas, α e β (RI-α, RI-β, RII-α y RII-β). Tras la unión de cAMP a las subunidades R, el contacto autoinhibitorio se facilita y se liberan las subunidades C monoméricas activas. PKA comparte especificidad de sustrato con Akt (PKB) y PKC, que se caracterizan por una arginina en la posición -3 con respecto al residuo de serina o treonina fosforilado (2). Los sustratos que presentan esta secuencia de consenso y que se ha demostrado que son fosforilados por PKA son Bad (Ser155), CREB (Ser133) y GSK-3 (GSK-3α Ser21 y GSK-3β Ser9) (3-5). Además, la supresión combinada de PKA C-α y -β bloquea la fosforilación mediada por cAMP de Raf (Ser43 y Ser259) (6). La autofosforilación y la fosforilación por PDK-1 son dos mecanismos conocidos responsables de la fosforilación de la subunidad C en Thr197 (7). Nombres alternativos Ca; PKA; ARNi Especificación REACTIVIDAD: H