CST, 68517S, PTMScan® Péptidos de control Di-metil arginina simétricos

Extractos celulares para estudio en el área de investigación. Información de uso del producto Úselo con el protocolo del kit PTMScan ® de Cell Signaling Technology desde el paso de purificación por inmunoafinidad (IAP). Debido a que la cantidad óptima de PTMScan ® Control Peptides Symmetric Di-Methyl Arginine para los experimentos de cada usuario dependerá de factores únicos, como la sensibilidad del espectrómetro de masas, los usuarios pueden diluir estos péptidos de control según sea necesario. 1. Alícuota de PTMScan ® Control Peptides Symmetric Di-Methyl Arginine para almacenamiento como unidades de un solo uso a -20 °C o proceda a su uso inmediato. 2. Resuspenda los péptidos de muestra en el tampón y volumen adecuados, por ejemplo, 1,4 ml de tampón PTMScan ® IAP (1X). 3. Aclare los péptidos de muestra mediante centrifugación. 4. Transfiera los péptidos de muestra clarificados a tubos que contengan perlas de IAP. 5. Agregue 10 µL de PTMScan® Control Peptides Symmetric Di-Methyl Arginine a las perlas IAP y a los péptidos de muestra y mezcle bien. 6. Continúe con los flujos de trabajo de PTMScan® o PTMScan® HS en el paso de incubación de 2 horas. 7. Detecte PTMScan® Control Peptides Symmetric Di-Methyl Arginine en el archivo de datos LCMS. Almacenamiento Este producto es estable durante 24 meses si se almacena a -20 °C. Separe el contenido para evitar múltiples ciclos de congelación y descongelación. Fondo La metilación de la arginina es una PTM prevalente que se encuentra tanto en proteínas nucleares como citoplasmáticas. Las proteínas metiladas con arginina participan en muchos procesos celulares diferentes, incluyendo la regulación transcripcional, la transducción de señales, el metabolismo del ARN y la reparación del daño del ADN (1-3). La metilación de la arginina es llevada a cabo por la familia de enzimas arginina N-metiltransferasa (PRMT) que catalizan la transferencia de un grupo metilo de S-adenosilmetionina (AdoMet) a un nitrógeno guanidínico de la arginina (4). Hay tres tipos diferentes de metilación de la arginina: dimetilarginina asimétrica (aDMA, omega-NG,NG-dimetilarginina), donde dos grupos metilo se colocan en uno de los átomos de nitrógeno terminales del grupo guanidínico de la arginina; dimetilarginina simétrica (sDMA, omega-NG,NG-dimetilarginina), donde un grupo metilo se coloca en cada uno de los dos nitrógenos guanidínicos terminales de la arginina; y monometilarginina (MMA, omega-NG-metilarginina), donde un solo grupo metilo se coloca en uno de los átomos de nitrógeno terminales de la arginina. Cada una de estas modificaciones tiene consecuencias funcionales potencialmente diferentes. Aunque todas las proteínas PRMT catalizan la formación de MMA, las PRMT de tipo I (PRMT1, 3, 4, 6 y 8) añaden un grupo metilo adicional para producir aDMA, mientras que las PRMT de tipo II (PRMT5 y 7) producen sDMA. Los residuos de arginina metilados a menudo residen en dominios proteicos ricos en glicina-arginina (GAR), como las repeticiones RGG, RG y RXR (5). Sin embargo, PRMT4/CARM1 y PRMT5 metilan residuos de arginina dentro de motivos ricos en prolina-glicina-metionina (PGM) (6). En precursores neuronales embrionarios de ratón indiferenciados, la histona H4R3 de sDMA es prevalente, pero en etapas posteriores del desarrollo, se detectan modificaciones tanto de sDMA como de aDMA H4R3 en neuronas postmitóticas y oligodendrocitos en desarrollo. Esto implica que las modificaciones de sDMA podrían ser eventos de regulación epigenética negativos, mientras que las modificaciones de aDMA podrían indicar sitios de activación epigenética (7).