CST, 69905L, tampón de extracción de células FastScan™ ELISA (5X)

Buffer para estudiar en el área de investigación. Información de uso del producto Tampón de Extracción Celular 1X: Prepare el tampón de extracción celular FastScan™ ELISA (5X) n.° 69905 y la solución potenciadora de extracción celular FastScan™ ELISA (50X) n.° 25243* diluyéndolos a 1X con agua desionizada. Este tampón puede conservarse a 4 °C para uso a corto plazo (1-2 semanas). Para preparar 10 ml de tampón de extracción celular 1X, combine 7,8 ml de agua desionizada, 2 ml de tampón de extracción celular FastScan™ ELISA (5X) y 200 µl de solución potenciadora de extracción celular FastScan™ ELISA (50X). Alternativamente, puede añadir la solución potenciadora al tampón de extracción celular después de la extracción de células o tejido. Si utiliza el tampón de extracción celular 1X como diluyente de muestra para el ensayo, se recomienda equilibrarlo a temperatura ambiente antes de su uso. *IMPORTANTE: La solución potenciadora de extracción celular FastScan™ ELISA (50X) puede precipitar si se almacena a 4 °C. Para disolverla, caliente brevemente a 37 °C y mezcle suavemente. La solución potenciadora de extracción celular FastScan™ ELISA (50X) se puede almacenar a temperatura ambiente para evitar la precipitación. NOTA: El tampón de extracción celular 1X contiene inhibidores de la fosfatasa. Los inhibidores de la proteasa se deben añadir al tampón de extracción celular 1X inmediatamente antes de lisar las células. También se pueden añadir inhibidores de la fosfatasa adicionales (p. ej., cóctel de inhibidores de proteasa/fosfatasa (100X) n.º 5872, no suministrado). Preparación de lisados ​​celulares Para células adherentes 1. Aspire el medio cuando el cultivo alcance una confluencia del 80-90 %. 2. Retire el medio y enjuague las células una vez con PBS 1X helado. 3. Retire el PBS y agregue 0.5 mL de tampón de extracción celular 1X helado (se recomienda complementar con inhibidores de proteasa e inhibidores de fosfatasa adicionales según sea necesario) a cada placa (10 cm de diámetro) e incube la placa en hielo durante 5 min. 4. Raspe las células de la placa y transfiéralas a un tubo apropiado. Manténgalas en hielo. 5. Sonice los lisados ​​en hielo. 6. Microcentrifuge durante 5 min (x14,000 rpm) a 4 °C y transfiera el sobrenadante a un tubo nuevo. El sobrenadante es el lisado celular. Almacene a -80 °C en alícuotas de un solo uso. Para células en suspensión 1. Retire el medio mediante centrifugación a baja velocidad (~1200 rpm) cuando el cultivo alcance 0.5-1.0 x 106 células viables/ml. 2. Lave una vez con PBS 1X helado. 3. Las células extraídas de 50 mL de medio de cultivo pueden lisarse en 2,0 mL de tampón de extracción celular 1X (se recomienda complementar con inhibidores de proteasa y de fosfatasa según sea necesario). 4. Sonicar los lisados ​​en hielo. 5. Microcentrifugar durante 5 min (x14.000 rpm) a 4 °C y transferir el sobrenadante a un tubo nuevo. El sobrenadante es el lisado celular. Conservar a -80 °C en alícuotas de un solo uso. Almacenamiento El tampón de extracción de células FastScan™ ELISA (5X) debe almacenarse a 4 °C.