CST, 7018S, tampón de lisis PathScan® Sandwich ELISA (1X)

Buffer para estudiar en el área de investigación. Información de uso del producto 1. Descongele el tampón 10x a 24-30 °C, mezclando de extremo a extremo. 2. Diluya el tampón de lisis ELISA 10X a una solución 1X usando ddH2O. 3. Enfríe el tampón 1X en hielo y agregue 1 mM de PMSF justo antes de usar. Lisis: Todos los reactivos y lisados ​​deben mantenerse fríos. 1. Trate las células como desee. 2. Lave la placa con PBS para eliminar el medio residual. 3. Agregue 1X a las células: (a) Para células adherentes, agregue 500-1000 µl de tampón de lisis ELISA 1X / placa de 10 cm. (b) Para células no adherentes, se debe usar el criterio en cuanto a la cantidad de tampón de lisis a agregar. La adición de un volumen igual al sedimento celular generalmente es apropiada. 4. Incube la placa en hielo durante 2 minutos. 5. Recoja la solución de lisado celular para su uso. 6. Centrifugue el extracto durante 5 minutos a 14.000 xg en una microcentrífuga fría. 7. Retire el sobrenadante para su uso. Se pueden añadir inhibidores de proteasa adicionales al tampón de lisis 1X sin dificultad. Almacenamiento Tampón de lisis ELISA 1X: Tris-HCl 20 mM (pH 7,5), NaCl 150 mM, Na₂EDTA 1 mM, EGTA 1 mM, Tritón al 1 %, pirofosfato de sodio 20 mM, fluoruro de sodio 25 mM, β-glicerofosfato 1 mM, Na₃VO₃ 1 mM, leupeptina 1 µg/ml. Para almacenamiento a largo plazo, mantenga el tampón 10X a -20 °C. Si el tampón se va a utilizar continuamente, se recomienda mantenerlo a 4 °C durante 1-2 semanas. Se recomienda la alícuota del tampón 10X si se van a realizar muchos experimentos pequeños. La solución 1X también puede alícuotarse en alícuotas de un solo uso y almacenarse a -20 °C. Fondo El tampón de lisis PathScan Sandwich ELISA (1X) fue desarrollado para aplicaciones ELISA y está formulado para inhibir mejor la clase de fosfatasas serina/treonina después de realizar los extractos celulares.