CST, 75964S, PTMScan® Péptidos de control Ubiquitina/SUMO

Extractos celulares para estudio en el área de investigación. Información de uso del producto Úselo con el protocolo del kit PTMScan® de Cell Signaling Technology desde el paso de Purificación por Inmunoafinidad (IAP). Dado que la cantidad óptima de péptidos de control PTMScan® de ubiquitina/SUMO para los experimentos de cada usuario dependerá de factores únicos como la sensibilidad del espectrómetro de masas, los usuarios pueden diluir estos péptidos de control según sea necesario. 1. Divida en alícuotas los péptidos de control PTMScan® de ubiquitina/SUMO para su almacenamiento como unidades de un solo uso a -20 °C o proceda a su uso inmediato. 2. Resuspenda los péptidos de muestra en el tampón y volumen adecuados, p. ej., 1,4 mL de tampón PTMScan® IAP (1X). 3. Aclare los péptidos de muestra mediante centrifugación. 4. Transfiera los péptidos de muestra aclarados a tubos con microesferas IAP. 5. Añada 10 µL de péptidos de control ubiquitina/SUMO de PTMScan® a las perlas IAP y a los péptidos de muestra y mezcle bien. 6. Continúe con los flujos de trabajo de PTMScan® o PTMScan® HS en el paso de incubación de 2 horas. 7. Detecte los péptidos de control ubiquitina/SUMO de PTMScan® en el archivo de datos de LCMS. Almacenamiento Este producto es estable durante 24 meses si se almacena a -20 °C. Separe el contenido para evitar múltiples ciclos de congelación y descongelación. Fondo La ubiquitina es una unidad polipeptídica conservada que desempeña un papel importante en la vía ubiquitina-proteasoma. La ubiquitina puede unirse covalentemente a muchas proteínas celulares mediante el proceso de ubiquitinación, que dirige las proteínas para su degradación por el proteasoma 26S. Tres componentes intervienen en el proceso de conjugación proteína diana-ubiquitina. La ubiquitina se activa primero mediante la formación de un complejo tioléster con el componente de activación E1; la ubiquitina activada se transfiere posteriormente a la proteína transportadora de ubiquitina E2, y luego de E2 a la ubiquitina ligasa E3 para su entrega final al épsilon-NH2 del residuo de lisina de la proteína diana (1-3). La vía ubiquitina-proteasoma se ha implicado en una amplia gama de procesos biológicos normales y en anomalías relacionadas con enfermedades. Se ha demostrado que varias proteínas, como IβB, p53, cdc25A y Bcl-2, son dianas del proceso ubiquitina-proteasoma como parte de la regulación de la progresión del ciclo celular, la diferenciación, la respuesta al estrés celular y la apoptosis (4-7). Los modificadores pequeños relacionados con la ubiquitina 1, 2 y 3 (SUMO-1, -2 y -3) pertenecen a la familia de proteínas similares a la ubiquitina (8). La unión covalente de SUMO-1, -2 o -3 (SUMOilación) a proteínas diana es análoga a la ubiquitinación. La ubiquitina y los miembros individuales de la familia SUMO se dirigen a diferentes proteínas con diversas funciones biológicas. La ubiquitina regula predominantemente la degradación de su diana (8). Por el contrario, SUMO-1 se conjuga con RanGAP, PML, p53 e IβB-α, regula el tráfico nuclear, forma estructuras subnucleares y regula la actividad transcripcional y la estabilidad proteica (9-13). SUMO-2/-3 forma cadenas de poli(SUMO), se conjuga con la topoisomerasa II y la APP, regula la segregación cromosómica y las respuestas celulares al estrés ambiental, y participa en la progresión de la enfermedad de Alzheimer (14-17).