CST, 7723S, Paquete de búfer de carga rojo

Kit Buffer para estudio en el área de investigación. Información de uso del producto 1. Prepare tampón de carga SDS reductor 3X nuevo añadiendo 1/10 del volumen de agente reductor DTT 30X a 1 volumen de tampón de carga SDS 3X. 2. Diluya el tampón de carga SDS 3X a una solución 1X con H₂Odd. Este producto proporciona suficiente material 3X para preparar 24 ml de solución 1X. 3. Aspire el medio de cultivo; lave las células con PBS 1X; aspire. 4. Lise las células añadiendo tampón de carga SDS 1X (100 µl por pocillo de una placa de 6 pocillos o 500 µl por placa de 10 cm²). Raspe inmediatamente las células de la placa y transfiera el extracto a un tubo de microcentrífuga. Manténgalo en hielo. 5. Sonice durante 10-15 segundos para cizallar el ADN y reducir la viscosidad de la muestra. 6. Calentar una muestra de 20 µl a 95-100 °C durante 5 minutos; enfriar en hielo. 7. Microcentrifugar durante 2-5 minutos. 8. Cargar 20 µl en un gel SDS-PAGE (10 cm x 10 cm). Almacenamiento Conservar a temperatura ambiente y a -20 °C. Tampón de carga rojo 3X: 187,5 mM Tris-HCl (pH 6,8 a 25 °C), 6 % (p/v) SDS, 30 % glicerol y 0,03 % (p/v) rojo fenol. (Conservar a temperatura ambiente). Agente reductor 30X: 1,25 M ditiotreitol (DTT) (Conservar a -20 °C).