CST, 8240S, Ubiquitil-Histona H2A (Lys119) (D27C4) Anticuerpo monoclonal de conejo

Anticuerpo monoclonal para el estudio del ubiquitinato H2A.4 (Lys119). Validado para WB, IP, IF, F, ChIP, ChIP, C&R, C&T. Disponible en dos tamaños. Altamente específico y rigurosamente validado internamente, el anticuerpo monoclonal de conejo Ubiquitil-Histona H2A (Lys119) (D27C4) (CST n.° 8240) está listo para su envío. Información de uso del producto Para obtener resultados óptimos de ChIP y ChIP-seq, utilice 5 µl de anticuerpo y 10 µg de cromatina (aproximadamente 4 x 10⁻¹ células) por IP. Este anticuerpo se ha validado con los kits de IP de cromatina enzimática SimpleChIP®. La dilución CUT&RUN se determinó con el kit de ensayo CUT&RUN n.° 86652. La dilución CUT&Tag se determinó con el kit de ensayo CUT&Tag n.° 77552. Western Blot: 1:2000 Inmunoprecipitación: 1:100 Inmunofluorescencia (inmunocitoquímica): 1:800 - 1:1600 Citometría de flujo (fijada/permeabilizada): 1:800 - 1:3200 IP de la cromatina: 1:100 IP-seq de cromatina: 1:100 CORTE Y CORRE: 1:50 CORTE Y ETIQUETA: 1:50 Almacenamiento Se suministra en 10 mM de HEPES sódico (pH 7,5), 150 mM de NaCl, 100 µg/ml de BSA, 50 % de glicerol y menos del 0,02 % de azida sódica. Conservar a -20 °C. No alicuotar el anticuerpo. Para obtener una versión sin transportador (BSA ni azida) de este producto, consulte el producto n.° 45772. Protocolo Protocolos disponibles: Western Blot, Inmunoprecipitación, Inmunofluorescencia (inmunocitoquímica), Citometría de flujo (fijada/permeabilizada), IP de cromatina, IP de cromatina-seq, CUT&RUN, CUT&Tag Especificidad / Sensibilidad El anticuerpo monoclonal de conejo Ubiquitil-Histona H2A (Lys119) (D27C4) reconoce los niveles endógenos de la proteína histona H2A solo cuando está ubiquitinada en Lys119. Este anticuerpo no presenta reacción cruzada con otras proteínas ubiquitinadas ni con la ubiquitina libre. Reactividad de las especies: humano, ratón, rata, mono Fuente / Purificación El anticuerpo monoclonal se produce inmunizando animales con un péptido sintético correspondiente a los residuos cercanos al extremo carboxiterminal de la proteína histona H2A humana en la que Lys119 está monoubiquitinada. Fondo El nucleosoma, compuesto por cuatro proteínas histonas centrales (H2A, H2B, H3 y H4), es el componente principal de la cromatina. Originalmente se creía que funcionaba como un andamiaje estático para el empaquetamiento del ADN, pero ahora se ha demostrado que las histonas son proteínas dinámicas que experimentan múltiples tipos de modificaciones postraduccionales, como la acetilación, la fosforilación, la metilación y la ubiquitinación (1). La ubiquitina es una unidad peptídica conservada de 76 aminoácidos que puede unirse covalentemente a muchas proteínas celulares mediante el proceso de ubiquitinación. Tres componentes intervienen en este proceso de conjugación proteína-ubiquitina. La ubiquitina se activa primero formando un complejo tioéster con el componente de activación E1; la ubiquitina activada se transfiere posteriormente a la proteína transportadora de ubiquitina E2, y luego de E2 a la ubiquitina ligasa E3 para su entrega final al épsilon-NH del residuo de lisina de la proteína diana (2). La histona H2A es monoubiquitinada en Lys119 por el complejo represor Polycomb 1 (PRC1) y es crucial para el silenciamiento transcripcional de los genes del desarrollo y la inactivación del cromosoma X (3-6). PRC1 está compuesto por Bmi1 y RING1A (también RING1 o RNF1), ambos potenciando la actividad de la ubiquitina ligasa E3 de la subunidad catalítica RING1B (también RING2 o RNF2) (3,4). La histona H2A también es monoubiquitinada en Lys119 en sitios de daño del ADN. Este evento de monoubiquitinación requiere los componentes de PRC1, Bmi1 y RING1B, además de otra ubiquitina ligasa E3, RNF8, y contribuye al reclutamiento posterior del complejo BRCA1, mediante la unión de RAP80/UIMC1 (motivo interactivo con ubiquitina que contiene 1 proteína) (7-10). Nombres alternativos bA317E16.2; Histona agrupada H2A 1; Familia de histonas H2A, miembro R; Histona agrupada H2A 1; H2A.4; H2A1A; H2AA; H2AC1; H2AFR; HIST1H2AA; Histona 1, H2aa; Grupo de histonas 1, miembro a de la familia H2A; Grupo de histonas 1, H2aa; Histona H2A tipo 1-A; Histona H2A/r; TH2A Especificación REACTIVIDAD: HMR Mk SENSIBILIDAD: Endógena Peso molecular (kDa): 23 Fuente/Isotipo: IgG de conejo