CST, 86652P, Kit de ensayo CUT&RUN

Kit CUT&RUN para estudiar en el área de investigación. Almacenamiento Todos los componentes de este kit son estables durante al menos 12 meses cuando se almacenan a la temperatura recomendada. Protocolo Protocolos disponibles: CUT&RUN Especificidad / Sensibilidad El kit de ensayo CUT&RUN puede utilizarse con cualquier anticuerpo validado por CUT&RUN para detectar niveles endógenos de interacciones proteína-ADN y modificaciones de histonas en células de mamíferos (véanse las figuras 1-6). El kit es compatible con diversas especies de anticuerpos, como conejo y ratón. El anticuerpo monoclonal de conejo tri-metil-histona H3 (Lys4) (C42D8) n.° 9751, como control positivo, detecta diversas especies de la proteína tri-metil-histona H3 Lys4, como humano, ratón, rata y mono. Se incluyen conjuntos de cebadores para el locus génico RPL30 de control positivo humano (n.° 7014) y ratón (n.° 7015); sin embargo, el uso de otras especies con el kit requiere el diseño de conjuntos de cebadores de control adicionales. Fondo Al igual que el ensayo de inmunoprecipitación de cromatina (ChIP), la técnica de escisión bajo dianas y liberación mediante nucleasa (CUT&RUN) es una técnica potente y versátil que se utiliza para sondear las interacciones proteína-ADN en el contexto cromatínico natural de la célula (1-4). Este ensayo puede utilizarse para identificar múltiples proteínas unidas a una única región genómica específica (mediante el uso de diferentes anticuerpos) o, a la inversa, para mapear las diversas regiones genómicas asociadas con una única proteína de interés. Además, el ensayo CUT&RUN permite definir la relación espacial y temporal de una interacción proteína-ADN específica. Por ejemplo, puede utilizarse para determinar el orden específico de reclutamiento de diversos factores proteicos a un promotor génico o para medir la magnitud relativa de una modificación de histona específica en todo un locus génico durante la activación génica. Además de las proteínas histonas, el ensayo CUT&RUN también puede utilizarse para analizar la unión de factores de transcripción y cofactores, factores de replicación del ADN y proteínas reparadoras del ADN (Figuras 1-6). CUT&RUN proporciona un ensayo rápido, robusto y de bajo número de células para la detección de interacciones proteína-ADN en la célula. A diferencia del ensayo ChIP, CUT&RUN no presenta entrecruzamiento con formaldehído, fragmentación de la cromatina ni inmunoprecipitación, lo que lo convierte en un método mucho más rápido y eficiente para enriquecer las interacciones proteína-ADN e identificar genes diana. CUT&RUN puede realizarse en menos de un día, desde células o tejido hasta ADN purificado, y se ha demostrado que funciona con tan solo 5000-10 000 células por ensayo (Figuras 1-4). En lugar de fragmentar toda la cromatina celular como se hace en ChIP, CUT&RUN utiliza una digestión de la cromatina dirigida por anticuerpos, lo que resulta en una señal de fondo mucho menor que la observada en el ensayo ChIP. Como resultado, CUT&RUN requiere solo una décima parte de la profundidad de secuenciación requerida para los ensayos ChIP-seq (1,2). Finalmente, la inclusión de ADN de control de levadura enriquecida permite una cuantificación y normalización precisas, corrigiendo las variaciones técnicas entre las muestras durante la purificación del ADN, la preparación de la biblioteca y los pasos de NGS. Nombres alternativos CnR; Cortar y ejecutar; CORTAR y etiquetar; cortar y ejecutar; Cortar y ejecutar; cortar y etiquetar; CUT&RUN; CUT&Tag; cortar y ejecutar; cortar y etiquetar; modificación de histonas