CST, 8713T, anticuerpo monoclonal de conejo fosfo-PLC gamma1 (Ser1248) (D25A9)

Anticuerpo monoclonal para el estudio de fosfato de PLCg1 (Ser1248). Validado para WB, WB, IP, IHC, IF y F. Disponible en dos tamaños. Altamente específico y rigurosamente validado internamente, el anticuerpo monoclonal de conejo Phospho-PLC gamma1 (Ser1248) (D25A9) (CST n.° 8713) está listo para su envío. Información de uso del producto Western Blot: 1:1000 Western Simple™: 1:10 - 1:50 Inmunoprecipitación: 1:50 Inmunohistoquímica (parafina): 1:100 - 1:400 Inmunofluorescencia (inmunocitoquímica): 1:100 - 1:200 Citometría de flujo (fijada/permeabilizada): 1:800 Almacenamiento Se suministra en 10 mM de HEPES sódico (pH 7,5), 150 mM de NaCl, 100 µg/ml de BSA, 50 % de glicerol y menos del 0,02 % de azida sódica. Conservar a -20 °C. No alicuotar el anticuerpo. Para obtener una versión sin transportador (BSA ni azida) de este producto, consulte el producto n.° 16685. Protocolo Protocolos disponibles: Western Blot, Inmunoprecipitación, Inmunohistoquímica (Parafina), Inmunofluorescencia (Inmunocitoquímica), Citometría de Flujo (Fijada/Permeabilizada) Especificidad / Sensibilidad El anticuerpo monoclonal de conejo Phospho-PLC gamma1 (Ser1248) (D25A9) reconoce niveles endógenos de proteína PLCγ1 solo cuando se fosforila en Ser1248. Reactividad de las especies: humano, ratón, mono Fuente / Purificación El anticuerpo monoclonal se produce inmunizando animales con un péptido sintético correspondiente a los residuos que rodean a Ser1248 de la proteína PLCγ1 humana. Fondo La fosfolipasa C específica de fosfoinosítidos (PLC) desempeña un papel importante en la señalización transmembrana. En respuesta a estímulos extracelulares, como hormonas, factores de crecimiento y neurotransmisores, la PLC hidroliza el fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato (PIP₃) para generar dos mensajeros secundarios: inositol 1,4,5-trifosfato (IP₃) y diacilglicerol (DAG) (1). Se han identificado al menos cuatro familias de PLC: PLCβ, PLCγ, PLCδ y PLCε. La fosforilación es uno de los mecanismos clave que regulan la actividad de la PLC. La PLCγ es activada tanto por tirosina quinasas receptoras como no receptoras (2). PLCγ forma un complejo con los receptores de EGF y PDGF, lo que conduce a la fosforilación de PLCγ en Tyr771, 783 y 1248 (3). La fosforilación por Syk en Tyr783 activa la actividad enzimática de PLCγ1 (4). PLCγ2 participa en la señalización dependiente de antígeno en linfocitos B y en la señalización dependiente de colágeno en plaquetas. La fosforilación por Btk o Lck en Tyr753, 759, 1197 y 1217 se correlaciona con la actividad de PLCγ2 (5,6). Se han clonado y caracterizado dos isoformas de PLCγ en mamíferos (γ1 y γ2) (7,8). Al igual que otros miembros de la familia PLC, PLCγ1 y PLCγ2 contienen dominios de unión a calcio (EF-hand, C2) e interacción lipídica (PH, EF-hand) necesarios para su actividad enzimática y el reconocimiento de sustratos. Excepcionalmente, las isoformas PLCγ poseen dominios SH2 y SH3 adicionales y conservados, cruciales para sus funciones como moléculas de señalización y proteínas de andamiaje. Tras la estimulación con factores de crecimiento, PLCγ1 se recluta (a través de los dominios SH2) hacia residuos de fosfotirosina en la cola citoplasmática de muchas RTK, donde actúa como sustrato para la RTK y proporciona sitios de acoplamiento para proteínas adicionales implicadas en la señalización de RTK (4-6,9-12). PLCγ1 y γ2 también pueden activarse aguas abajo de receptores que carecen de actividad tirosina quinasa intrínseca. Esto se ha reportado aguas abajo de múltiples receptores acoplados a proteína G y el receptor de células T en el cual las tirosina quinasas de las familias Src, Syk y Tec sirven para unir, fosforilar y activar PLCγ (revisado en 13-15). La fosforilación en residuos de tirosina por tirosina quinasas tanto receptoras como no receptoras resulta en una activación robusta de la actividad de PLCγ1, lo que lleva a la generación de segundos mensajeros. En respuesta a agonistas, PLCγ1 es fosforilado en Tyr783, Tyr711 y Tyr1253 (Tyr753, Tyr759 y Tyr1217 en PLCγ2) resultando en una robusta hidrólisis de PI-4,5-P (4-6,9-12). Curiosamente, evidencia reciente sugiere un papel para la regulación independiente de la tirosina quinasa de PLCγ en algunos sistemas. Por ejemplo, en respuesta al EGF, las regiones ricas en prolina de Akt interactúan con el dominio SH3 de PLCγ1, lo que resulta en la asociación de ambas enzimas, la fosforilación de PLCγ1 en Ser1248 y una mayor motilidad celular (16). Este hallazgo demuestra que PLCγ1 puede funcionar como un "andamiaje" entre las RTK y Akt, estableciendo así un mecanismo mediante el cual la vía de señalización de Akt interactúa con las tirosina quinasas. Sin embargo, el mecanismo y la importancia funcional de la fosforilación en Ser1248 aún no se han esclarecido por completo, ya que también se ha demostrado que la fosforilación mediada por PKA en este sitio inhibe la fosforilación de tirosina de PLCγ1 y la actividad de la fosfolipasa en células Jurkat tratadas con CD3 (17), lo que sugiere que Ser1248 podría ser un regulador alostérico de la actividad de PLCγ1. Nombres alternativos 1-fosfatidil-D-mioinositol-4,5-bisfosfato; 1-fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato fosfodiesterasa gamma-1; 1-fosfatidilinositol-4,5-bisfosfato fosfodiesterasa gamma 1; 1-fosfatidilinositol-4,5-bisfosfato fosfodiesterasa gamma-1; inositoltrisfosfohidrolasa; monofosfatidilinositol fosfodiesterasa; NCKAP3; fosfatidilinositol fosfolipasa C; fosfoinositidasa C; fosfoinosítido fosfolipasa C; fosfoinosítido fosfolipasa C-gamma-1; fosfolipasa C gamma 1; fosfolipasa C-148; fosfolipasa C-gamma-1; fosfolipasa C-II; fosfolipasa C, gamma 1; fosfolipasa C, gamma 1 (anteriormente subtipo 148); PLC-148; PLC-gamma-1; PLC-II; PLC1; PLC148; PLCG1; PLCgamma1; trifosfoinosítido fosfodiesterasa Especificación REACTIVIDAD: HM Mk SENSIBILIDAD: Endógena Peso molecular (kDa): 150 Fuente/Isotipo: IgG de conejo