CST, 8821S, Kit de detección de Ras activo

Kit de ensayo para el estudio de HRas en el área de investigación. Almacenamiento GTPγS: Almacenar a -80 °C GDP: Almacenar a -80 °C GST-Raf1-RBD: Almacenar a -80 °C Tampón de lisis/unión/lavado: Almacenar a 4 °C Resina de glutatión: Almacenar a 4 °C Tampón de muestra SDS: Almacenar a 4 °C Vaso de centrifugación y tubos de recolección: Almacenar a temperatura ambiente mAb de ratón Ras: Almacenar a 4 °C Protocolo Protocolos disponibles: Funcional Especificidad / Sensibilidad El kit de detección de Ras activo detecta niveles endógenos de Ras unido a GTP (activo), como se muestra en la Figura 1. Este kit detecta proteínas de las especies indicadas, según lo determinado mediante pruebas internas, pero también puede detectar proteínas homólogas de otras especies. El anticuerpo monoclonal de ratón Ras n.° 8832 incluido en el kit detecta Ras H, K y N y presenta reacción cruzada con Ras humano, de ratón y de rata. Reactividad de las especies: humano, ratón Fondo La superfamilia Ras de pequeñas proteínas de unión a GTP (proteínas G) comprende una gran clase de proteínas (más de 150 miembros) que pueden clasificarse en al menos cinco familias según su secuencia y similitudes funcionales: Ras, Rho, Rab, Arf y Ran (1-3). Estas pequeñas proteínas G tienen actividades tanto de unión a GDP/GTP como de GTPasa y funcionan como interruptores binarios en diversos eventos celulares y de desarrollo que incluyen la progresión del ciclo celular, la supervivencia celular, la organización del citoesqueleto de actina, la polaridad y el movimiento celular, y el transporte vesicular y nuclear (1). Una señal aguas arriba estimula la disociación de GDP de la forma unida a GDP (inactiva), lo que conduce a la unión de GTP y la formación de la forma unida a GTP (activa). La proteína G activada luego pasa por un cambio conformacional en su región de unión al efector aguas abajo, lo que conduce a la unión y regulación de los efectores aguas abajo. Esta activación puede ser desactivada por la actividad intrínseca de la GTPasa, que hidroliza el GTP a GDP y libera los efectores posteriores. Estas actividades intrínsecas de intercambio de nucleótidos de guanina e hidrólisis de GTP de las proteínas de la superfamilia Ras también están reguladas por los factores de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) que promueven la formación de la forma activa unida a GTP y las proteínas activadoras de GTPasa (GAP) que devuelven la GTPasa a su forma inactiva unida a GDP (4). Las proteínas de unión a nucleótidos de guanina de 21 kDa (K-Ras, H-Ras y N-Ras) alternan entre las formas activa (unida a GTP) e inactiva (unida a GDP) (5). Las tirosina quinasas receptoras y los receptores acoplados a proteína G activan Ras, que luego estimula la vía Raf-MEK-MAPK (6-8). Las proteínas GAP normalmente facilitan la inactivación de Ras. Sin embargo, en el 30 % de los tumores humanos, las mutaciones puntuales en Ras impiden la inhibición de esta vía mediada por GAP (9). La mutación oncogénica de Ras más común en tumores es la de Gly12 a Asp (G12D), que impide la inactivación de Ras, posiblemente al aumentar la rigidez general de la proteína (9,10). Nombres alternativos 11521; 11522; 11523; 11524; 11525; 11526; 11860; 11871; 8784; 8832; GTPasa; raf; ras