CST, 9005S, Kit de cromatina enzimática IP SimpleChIP® Plus (perlas magnéticas)

Kit ChIP para estudiar en el área de investigación. Almacenamiento Almacene los componentes a las temperaturas indicadas en las etiquetas de cada tubo. Protocolo Protocolos disponibles: IP de cromatina, IP de cromatina-seq Especificidad / Sensibilidad El SimpleChIP Fondo El ensayo de inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) es una técnica potente y versátil que se utiliza para investigar las interacciones proteína-ADN en el contexto cromatínico natural de la célula (1,2). Este ensayo puede utilizarse para identificar múltiples proteínas asociadas a una región específica del genoma, o, por el contrario, para identificar las múltiples regiones del genoma unidas por una proteína en particular (3-6). Puede utilizarse para determinar el orden específico de reclutamiento de diversas proteínas a un promotor génico o para medir la cantidad relativa de una modificación de histona específica en todo un locus génico (3,4). Además de las proteínas histonas, el ensayo ChIP puede utilizarse para analizar la unión de factores de transcripción y cofactores, factores de replicación del ADN y proteínas reparadoras del ADN. Al realizar el ensayo ChIP, las células o tejidos se fijan primero con formaldehído, un agente de entrecruzamiento reversible proteína-ADN que preserva las interacciones proteína-ADN que ocurren en la célula (1,2). Las células se lisan y la cromatina se recolecta y fragmenta mediante sonicación o digestión enzimática. Posteriormente, la cromatina se inmunoprecipita con anticuerpos específicos para una proteína o modificación de histona en particular. Cualquier secuencia de ADN asociada con la proteína o modificación de histona de interés coprecipitará como parte del complejo de cromatina reticulada, y la cantidad relativa de dicha secuencia de ADN se enriquecerá mediante el proceso de inmunoselección. Tras la inmunoprecipitación, se revierten los enlaces cruzados proteína-ADN y el ADN se purifica. La PCR estándar o la PCR cuantitativa en tiempo real se pueden utilizar para medir el grado de enriquecimiento de una secuencia de ADN específica mediante una inmunoprecipitación específica para la proteína (1,2). Como alternativa, el ensayo ChIP puede combinarse con técnicas de microarray de teselación genómica (ChIP en chip), secuenciación de alto rendimiento o estrategias de clonación, todas las cuales permiten el análisis de todo el genoma de las interacciones proteína-ADN y las modificaciones de histonas (5-8). Nombres alternativos chip; chip sobre chip; chip-seq; chip validado; chipkit; ip de cromatina; inmunoprecipitación; chip de tejido