CST, 9006S, Perlas magnéticas de proteína G de grado ChIP

Reactivos de Afinidad y Purificación para estudio en el área de investigación. Información de uso del producto Agite brevemente el tubo en vórtex para resuspender las microesferas. Añada 30 µl de suspensión de microesferas a cada reacción de inmunoprecipitación de cromatina (ChIP). Para el lavado de microesferas y la posterior elución de inmunocomplejos, las microesferas se pueden separar de la solución utilizando nuestra gradilla de separación magnética de 6 tubos n.° 7017. Coloque los tubos con las microesferas en la gradilla de separación magnética y espere de 1 a 2 minutos a que la solución se aclare antes de retirar con cuidado el sobrenadante. Retire los tubos de la gradilla de separación magnética, añada nueva solución y resuspenda las microesferas agitando suavemente el tubo en vórtex o agitándolo. Almacenamiento Se suministra en PBS (pH 7,2), 0,05 % de Tween® 20, 0,1 % de BSA y 0,05 % de azida sódica. Conservar a 4 °C. Este producto es estable durante 12 meses. Fondo El ensayo de inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) es una técnica potente y versátil que se utiliza para investigar las interacciones proteína-ADN en el contexto cromatínico natural de la célula (1,2). Este ensayo puede utilizarse para identificar múltiples proteínas asociadas a una región específica del genoma, o, por el contrario, para identificar las múltiples regiones del genoma unidas por una proteína en particular (3-6). Puede utilizarse para determinar el orden específico de reclutamiento de diversas proteínas a un promotor génico o para medir la cantidad relativa de una modificación de histona específica en todo un locus génico (3,4). Además de las proteínas histonas, el ensayo ChIP puede utilizarse para analizar la unión de factores de transcripción y cofactores, factores de replicación del ADN y proteínas reparadoras del ADN. Al realizar el ensayo ChIP, las células o tejidos se fijan primero con formaldehído, un agente de entrecruzamiento reversible proteína-ADN que preserva las interacciones proteína-ADN que ocurren en la célula (1,2). Las células se lisan y la cromatina se recolecta y fragmenta mediante sonicación o digestión enzimática. Posteriormente, la cromatina se inmunoprecipita con anticuerpos específicos para una proteína o modificación de histona en particular. Cualquier secuencia de ADN asociada con la proteína o modificación de histona de interés coprecipitará como parte del complejo de cromatina reticulada, y la cantidad relativa de dicha secuencia de ADN se enriquecerá mediante el proceso de inmunoselección. Tras la inmunoprecipitación, se revierten los enlaces cruzados proteína-ADN y el ADN se purifica. La PCR estándar o la PCR cuantitativa en tiempo real se pueden utilizar para medir el grado de enriquecimiento de una secuencia de ADN específica mediante una inmunoprecipitación específica para la proteína (1,2). Como alternativa, el ensayo ChIP puede combinarse con técnicas de microarray de teselación genómica (ChIP en chip), secuenciación de alto rendimiento o estrategias de clonación, todas las cuales permiten el análisis de todo el genoma de las interacciones proteína-ADN y las modificaciones de histonas (5-8). Nombres alternativos chip; chip sobre chip; chip validado; chipkit; cromatina-ip; inmunoprecipitación; perlas magnéticas; proteína A; proteína G