CST, 91336S, Kit PTMScan® con motivo de fosforilación-X-Arg [pT(P/X)R]

PTMScan para estudiar en el área de investigación. Información de uso del producto Las células se lisan en un tampón con urea, las proteínas celulares se digieren con proteasas y los péptidos resultantes se purifican mediante extracción en fase sólida en fase reversa. A continuación, los péptidos se someten a purificación por inmunoafinidad utilizando un anticuerpo PTMScan® Motif conjugado con perlas de agarosa de proteína A. Los péptidos no unidos se eliminan mediante lavado y los péptidos capturados con PTM se eluyen con ácido diluido. La purificación en fase reversa se realiza en micropuntas para desalinizar y separar los péptidos del anticuerpo antes de concentrar los péptidos enriquecidos para su análisis por LC-MS/MS. CST recomienda el uso del tampón PTMScan® IAP n.° 9993, incluido en el kit. Almacenamiento Las perlas de anticuerpo se suministran en tampón IAP con 50 % de glicerol. Conservar a -20 °C. No alicuotar el anticuerpo. Protocolo Protocolos disponibles: PTMScan Fondo Las familias MAPK y CDK de las proteínas quinasas de serina/treonina desempeñan un papel importante en la proliferación y el control del ciclo celular. Estas quinasas fosforilan residuos de treonina o serina seguidos de un residuo de prolina (1-3). MAPK fosforila sustratos con la secuencia consenso PX(S/T)P y las CDK fosforilan sustratos que contienen la secuencia consenso (S/T)PXR/K (4,5). Algunas moléculas de señalización pueden regularse mediante la fosforilación en una treonina específica seguida de una arginina o lisina en la posición +2. Por ejemplo, las isozimas PKC convencionales fosforilan sustratos que contienen una serina o treonina con Arg o Lys en las posiciones -3, -2 y +2 (6,7). Cell Signaling Technology ha desarrollado anticuerpos que se unen a los sitios de fosforilación que contienen el motivo T(P/X)R para el descubrimiento y la elaboración de perfiles de sustratos de quinasas a nivel de proteoma. Nombres alternativos TPR; TXR