CST, 93872S, Kit PTMScan® de malonil-lisina [Mal-K]

PTMScan para estudiar en el área de investigación. Información de uso del producto Las células se lisan en un tampón con urea, las proteínas celulares se digieren con proteasas y los péptidos resultantes se purifican mediante extracción en fase sólida en fase reversa. A continuación, los péptidos se someten a purificación por inmunoafinidad utilizando un anticuerpo PTMScan® Motif conjugado con perlas de agarosa de proteína A. Los péptidos no unidos se eliminan mediante lavado y los péptidos capturados con PTM se eluyen con ácido diluido. La purificación en fase reversa se realiza en micropuntas para desalinizar y separar los péptidos del anticuerpo antes de concentrar los péptidos enriquecidos para su análisis por LC-MS/MS. CST recomienda el uso del tampón PTMScan® IAP n.° 9993, incluido en el kit. Almacenamiento Las perlas de anticuerpo se suministran en tampón IAP con 50 % de glicerol. Conservar a -20 °C. No alicuotar el anticuerpo. Protocolo Protocolos disponibles: PTMScan Fondo La lisina está sujeta a una amplia gama de modificaciones postraduccionales regulatorias debido a su cadena lateral del grupo ε-amino con carga positiva. Las más frecuentes son la ubiquitinación y la acetilación, que están altamente conservadas entre procariotas y eucariotas (1,2). La transferencia de grupos acilo desde los intermediarios metabólicos acetil-, succinil-, malonil-, glutaril-, butiril-, propionil- y crotonil-CoA neutraliza la carga positiva de la lisina y confiere alteraciones estructurales que afectan la función de la proteína sustrato. La acetilación de la lisina es catalizada por las histonas acetiltransferasas, HAT, que utilizan acetil-CoA como cofactor (3,4). La desacilación está mediada por las histonas desacetilasas, HDAC 1-11, y las sirtuinas 1-7 dependientes de NAD+. Algunas sirtuinas tienen poca o ninguna actividad desacetilasa, lo que sugiere que son más adecuadas para otros sustratos de acil lisina (5). Sirt 5 es una desuccinilasa y demalonilasa predominantemente mitocondrial (5,6). En ausencia de una maloniltransferasa conocida, la malonilación proteica no enzimática probablemente esté impulsada por la concentración de malonil-CoA y el pH intracelular y está sujeta a fluctuaciones metabólicas (7). La malonilación es especialmente prevalente entre las proteínas metabólicas mitocondriales. En modelos murinos con diabetes tipo II, se puede detectar una malonilación notablemente elevada principalmente, pero no exclusivamente, en proteínas del metabolismo de la glucosa y los ácidos grasos (8). La malonilación de la histona de levadura H3K56 sugiere una baja eficiencia de unión al ADN y puede conducir a una viabilidad celular reducida (9). Nombres alternativos lisina; malonilo; malonilación; motivo