CST, 96471S, Ubiquitina de ramificación múltiple TUBE-RAD23A (Conjugado de perlas de sefarosa)

Reactivos de Afinidad y Purificación para estudio en el área de investigación. Información de uso del producto Añadir las microesferas a una dilución de 1:20 a los lisados ​​celulares preparados en tampón de lisis celular 1X (10X) n.º 9803. Mezclar durante la noche a 4 °C. Lavar cinco veces en tampón de lisis celular 1X. Para más detalles, consultar el protocolo de inmunoprecipitación para proteínas nativas. Almacenamiento Se suministra como una suspensión de microesferas al 50 % en 10 mM de HEPES sódico (pH 7,5), 150 mM de NaCl, 100 µg/mL de BSA y 50 % de glicerol. Conservar a -20 °C. No alicuotar. Protocolo Protocolos disponibles: Inmunoprecipitación Especificidad / Sensibilidad TUBE-RAD23A se une a niveles endógenos de proteínas que contienen cadenas poliubiquinadas. Se une a las cadenas de tetraubiquitina ramificadas K48 y K63. Reactividad de las especies: Se espera que se presenten todas las especies Fuente / Purificación TUBE, diseñado a partir del dominio de unión de ubiquitina de RAD23A, se produjo en . Fondo La ubiquitina es una unidad polipeptídica conservada que desempeña un papel importante en la vía ubiquitina-proteasoma. Puede unirse covalentemente a numerosas proteínas celulares mediante el proceso de ubiquitinación, que dirige las proteínas para su degradación por el proteasoma 26S. Tres componentes intervienen en el proceso de conjugación proteína diana-ubiquitina. La ubiquitina se activa primero mediante la formación de un complejo tioléster con el componente de activación E1; posteriormente, la ubiquitina activada se transfiere a la proteína transportadora de ubiquitina E2, y luego de E2 a la ubiquitina ligasa E3 para su transporte final al épsilon-NH del residuo de lisina de la proteína diana (1-3). La vía ubiquitina-proteasoma se ha implicado en una amplia gama de procesos biológicos normales y en anomalías relacionadas con enfermedades. Se ha demostrado que varias proteínas como IβB, p53, cdc25A y Bcl-2 son dianas del proceso ubiquitina-proteasoma como parte de la regulación de la progresión del ciclo celular, la diferenciación, la respuesta al estrés celular y la apoptosis (4-7). Las proteínas sustrato se unen a la ubiquitina mediante siete residuos de lisina de ubiquitina distintos (Lys6, Lys11, Lys27, Lys29, Lys33, Lys48 y Lys63). La formación de una cadena de poliubiquitina ocurre cuando un residuo de lisina de ubiquitina se une a la glicina carboxiterminal de otra ubiquitina. Las proteínas poliubiquitinadas en residuos de lisina específicos muestran una tendencia a ser diana para diferentes procesos; las cadenas de poliubiquitina ligadas a K48 se dirigen principalmente a proteínas para la degradación proteasomal, mientras que las cadenas de poliubiquitina ligadas a K63 regulan la función proteica, la localización subcelular o las interacciones proteína-proteína (8). Las cadenas de poliubiquitina unidas a K63 ejercen funciones no proteolíticas, como el tráfico de proteínas, la activación de quinasas/fosfatasas y el control del daño del ADN, todo lo cual podría ser importante en la regulación de la supervivencia y el desarrollo del cáncer (9,10). Los dominios asociados a la ubiquitina (UBA) son regiones proteicas que interactúan con la ubiquitina. Las entidades de unión a la ubiquitina repetidas en tándem (TUBE) se diseñaron utilizando cuatro dominios UBA en tándem, basándose en la teoría de que las cadenas de tetraubiquitina son un requisito mínimo para la degradación proteasomal eficiente (11). Los TUBE diseñados con dominios UBA de UBQLN1 y RAD23A se unen a las cadenas de tetraubiquitina unidas a K48 y K63 y pueden usarse para purificar eficientemente las proteínas ubiquitiladas de los extractos celulares (12).