Cytiva, 1001161, kits de células T GenVoy-ILM™ para ARNm

Kit de células T GenVoy-ILM™ para ARNm, Ignite™, 6 mL El kit de células T GenVoy-ILM™ para ARNm es una mezcla de reactivos de nanopartículas lipídicas (LNP) optimizada para la administración de ARNm o ARNm Cas9 CRISPR con ARNg en células T primarias humanas utilizando LNP preparadas en los sistemas NanoAssemblr™ Spark™ e Ignite™. Los kits de células T GenVoy-ILM™ para ARNm ofrecen las siguientes ventajas: Eliminación y expresión altamente eficientes: El ARNm o ARNm/sgARN se puede administrar en células T primarias humanas activadas de forma consistente con una alta eficiencia de eliminación génica. Alta viabilidad celular: Mantiene una alta viabilidad de las células T, incluso después de la manipulación genética secuencial. Escalabilidad: Escala tu investigación en terapia celular en la plataforma NanoAssemblr™ desde el descubrimiento hasta la fase preclínica. Validado con el flujo de trabajo de fabricación de células T: Optimizado y validado para el flujo de trabajo posterior de cultivo de células T. Los kits permiten a los investigadores establecer un método clínicamente relevante y escalable para la administración y edición génica ex vivo para avanzar en el desarrollo de terapias con células T. Estos kits se pueden utilizar en diversas etapas de la investigación y el desarrollo de terapia celular, desde el descubrimiento hasta la fase preclínica, en todas las plataformas NanoAssemblr™. Mayor proporción de células T diseñadas en comparación con la electroporación (EP). El uso del kit de células T GenVoy-ILM™ para ARNm para administrar ARNm a células T primarias humanas activadas da como resultado un mayor número de células T diseñadas. Este método demuestra un método de administración de genes más eficaz en comparación con la EP. La eficiencia de la transfección se midió por la expresión de proteínas mediante citometría de flujo a las 24 y 48 horas posteriores al tratamiento. La EP se realizó siguiendo el protocolo del fabricante y el tratamiento con LNP se realizó siguiendo el protocolo del kit de células T GenVoy-ILM™ para ARNm en Spark™. Las células no tratadas (UT) se usaron como control. **p<0,01, ****p<0,0001 por ANOVA de una vía. Expresión uniforme de proteínas celulares La ingeniería de células T primarias humanas mediante el kit de células T GenVoy-ILM™ para ARNm da como resultado una expresión de proteínas altamente uniforme en toda la población de células tratadas. Se generaron gráficos representativos de intensidad de fluorescencia media (MFI) de la expresión de proteínas de la superficie celular mediante citometría de flujo a las 24 y 48 horas posteriores al tratamiento. El EP se realizó siguiendo el protocolo del fabricante. Se usaron células no tratadas (UT) como controles. Células T altamente viables Las células T primarias humanas activadas siguen siendo altamente viables después de la administración de genes ex vivo utilizando el kit de células T GenVoy-ILM™ para ARNm. La viabilidad celular se midió mediante citometría de flujo a las 24 y 48 horas posteriores al tratamiento. El EP se realizó siguiendo el protocolo del fabricante y el tratamiento con LNP se realizó siguiendo el protocolo del kit de células T GenVoy-ILM™ para ARNm en Spark™. Se usaron células no tratadas (UT) como controles. ****p < 0,0001 mediante ANOVA de una vía. Ingeniería de células T en varios pasos para terapia celular lista para usar Logre knockouts de edición genómica altamente eficientes en combinación con altos niveles de expresión de CD19 CAR. Esto permite la ingeniería de células T CAR "universales" funcionales y viables que eliminan eficazmente las células tumorales CD19+. A) Ilustración esquemática del experimento. Se añadieron ARNm-LNP que contenían sgRNA + ARNm de Cas9 a las células T primarias. Las células se expandieron antes del tratamiento con CAR CD19 mRNA-LNP. A las 24 horas posteriores al tratamiento con CAR mRNA-LNP, se realizó un ensayo de eliminación de células T CD19+ durante 16 horas. B) Se evaluó la eficiencia de eliminación de TCR. La muestra de partida fue TCR negativa seleccionada para purificar aún más la población TCR-. C) Izquierda: Porcentaje de expresión de CAR CD19 24 horas después del tratamiento con CAR mRNA-LNP a 3,2 μg de ARN/millón de células, cuando la población es TCR+ o TCR−. Derecha: Viabilidades celulares correspondientes, normalizadas a la población sin tratar. D) Eliminación funcional de células B CD19+ (SUP-B15) por UT, TCR+/CAR+ o células T TCR−/CAR+ editadas genéticamente en las proporciones efector-diana indicadas (E:T). Para todos, se aplicó una dosis de 3,2 μg de ARN/millón de células. Las barras de error representan la desviación estándar. La significancia estadística se evaluó usando pruebas t o ANOVA unidireccional entre los grupos mostrados (2). Escalado desde descubrimiento a preclínico Los datos demuestran que los kits de células T GenVoy-ILM™ y la plataforma escalable NanoAssemblr™ permiten un rendimiento robusto y equivalente en los instrumentos Spark™ e Ignite™ permitiendo el escalado desde descubrimiento a preclínico. A) GFP y B) eficiencia de transfección de CD19 CAR 24 horas después de la adición de ARNm-LNP. C) Niveles de knockout de un solo objetivo (receptor de células T, TCR), y D) knockout de doble objetivo (TCR y CD52) a través de la administración de sgRNA y ARNm Cas9. E) Muerte funcional de células B CD19+ (SUP-B15) en un experimento de co-cultivo de 16 horas. Para todos: se aplicó una dosis de 3,2 μg de ARN/millón de células a células T primarias humanas. Los ARN-LNP se prepararon según las guías de usuario del kit de células T GenVoy-ILM™ para ARNm en Spark™ o Ignite™. La expresión génica promedio y la inactivación génica se detectaron mediante citometría de flujo, mostrando un mínimo de n = 8 preparaciones independientes de ARN-LNP y n = 2 donantes. La capacidad de eliminación funcional se detectó mediante citometría de flujo, mostrando n = 2 preparaciones independientes de ARN-LNP y n = 2 donantes. Las barras de error representan la desviación estándar, con significación estadística evaluada mediante pruebas t entre los grupos seleccionados (2). Componentes del kit

	Kit de células T GenVoy-ILM™ para ARNm, Spark™ (n.º de pieza 1000700)	Kit de células T GenVoy-ILM™ para ARNm con cartucho de 5 Spark™ (n.º de pieza 1000683)	Kit de células T GenVoy-ILM™ para ARNm, Ignite™, 3 mL, (N.º de pieza 1001144)	Kit de células T GenVoy-ILM™ para ARNm, Ignite™, 6 mL, (N.º de pieza 1001161)
Mezcla de lípidos	90 µL	90 µL	3 ml	6 ml
Tampón de formulación (10X)	30 µL	30 µL	2 ml	4 ml
Tampón de dilución (10X)	900 µL	900 µL	40 ml	80 ml
Tampón de criopreservación (2X)	-	-	3 ml	6 ml
Apolipoproteína E (ApoE)	50 µg	50 µg	500 µg	500 µg x 2
Cartuchos de chispa	-	5	-	-