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La neuraminidasa hidroliza los ácidos N- u O-acilneuramínicos terminales con enlaces α2,3, α2,6 o α2,8 (velocidad: α2,6 > α2,3 > α2,8) a oligosacáridos, polisacáridos, mucopolisacáridos, glucoproteínas y glucolípidos. Cabe destacar que para la hidrólisis de glucolípidos es necesaria la presencia de un detergente. Debido a su amplia especificidad de sustrato, la enzima es muy adecuada para la eliminación completa de ácidos siálicos de los glucoconjugados de una amplia variedad de materiales biológicos.
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