Merck, 11175025910, Kit de etiquetado de ARN DIG (SP6/T7)

Tiempo de ensayo: 145 minutos Materiales de muestra •ADN plasmídico linealizado •Producto de PCR Principio El kit de etiquetado de ARN DIG produce sondas de ARN monocatenarias marcadas con DIG de longitud conocida. La ARN polimerasa SP6 o T7 transcribe estas sondas in vitro a partir del ADN molde (en presencia de digoxigenina-UTP). Etiquetado de ARN por transcripción in vitro El ADN que se va a transcribir se clona en el sitio polienlazador de los vectores de transcripción apropiados (p. ej., pSPT 18 o 19), que contienen promotores para las ARN polimerasas SP6 y T7. El ADN molde adyacente se linealiza en un sitio adecuado y las ARN polimerasas se utilizan para producir transcripciones \run off\. Se incorpora DIG-UTP a la transcripción. Cada nucleótido 20 a 25 del ARN recién sintetizado es un DIG-UTP. Dado que la concentración de nucleótidos no se vuelve limitante en la reacción de transcripción estándar, esta reacción puede generar grandes cantidades de ARN marcado.