Merck, 11815024001, Matriz de afinidad anti-proteína C

La proteína C es un zimógeno plasmático dependiente de la vitamina K que se activa mediante la escisión proteolítica del complejo trombina-trombomodulina para formar una enzima anticoagulante. El anticuerpo monoclonal murino anti-proteína C (clon HPC4) se une específicamente a una secuencia epitópica que abarca el sitio de escisión de la trombina de la proteína C y se inmoviliza. La anti-proteína C reconoce la secuencia de 12 aminoácidos (EDQVDPRLIDGK), que codifica los residuos 6 a 17 de la cadena pesada de la proteína C. La formación del complejo anti-proteína C/epítopo de la proteína C depende de la presencia de iones de calcio. En presencia de Ca²⁺, el anticuerpo se une con alta afinidad y especificidad a esta secuencia en la proteína C humana nativa o en proteínas marcadas con este epítopo. Esta eficiente unión dentro de la proteína de fusión recombinante ocurre independientemente del sitio de incorporación de la etiqueta del epítopo (es decir, N-terminal, C-terminal o dentro del marco de lectura). Este anticuerpo único es especialmente adecuado para la purificación de proteínas de fusión recombinantes marcadas con el epítopo de la proteína C. •La inserción de la etiqueta de la proteína C no introduce un nuevo sitio de unión de iones metálicos. El anticuerpo contiene el sitio de unión de Ca²⁺. •La etiqueta de la proteína C se puede integrar en el N-terminal, C-terminal o internamente sin ningún cambio en la especificidad del anticuerpo. •Purificación rápida por inmunoafinidad en condiciones no desnaturalizantes utilizando un agente quelante de calcio económico (p. ej., EDTA) o, alternativamente, un péptido específico de la etiqueta de la proteína C. El anticuerpo monoclonal de ratón anti-proteína C (clon HPC4) se acopla covalentemente a perlas de agarosa. En la reacción de acoplamiento, se hacen reaccionar 4 mg de anticuerpo por 1 ml de perlas.