Merck, 17-10499, Kit Magna MeRIP m6A: Perfil de todo el transcriptoma de N6-metiladenosina

La N6-metiladenosina (m6A) representa una abundante modificación del ARN que se conserva en muchas especies diferentes, desde plantas hasta levaduras y mamíferos. Similar a la modificación de la 5-metilcitosina (5-mc) del ADN, la m6A es una modificación química reversible del ARN. Las modificaciones del ARN m6A son un tema emergente en el control de las transiciones del destino celular en células madre embrionarias de mamíferos. La m6A es una de las modificaciones más prevalentes tanto en ARNm como en ARN no codificante en eucariotas, con un estimado de 12.000 sitios m6A en más de 7.000 genes. La marca es depositada por un heterodímero de metiltransferasas 3 y 14 (Mettl3 y Mettl14) y puede ser eliminada por las enzimas desmetilasas de ARN FTO y ALKBH5. El gen de riesgo de obesidad FTO codifica la primera desmetilasa m6A identificada. Las mutaciones en FTO se han asociado con un mayor riesgo de obesidad y diabetes tipo II. Recientemente, el deterioro del estado de la regulación de m6A ha llevado a la expresión prolongada de Nanog en células ES y a la incapacidad de salir de las etapas de auto-renovación hacia la diferenciación. La inmunoprecipitación de ARN metilado (m6A) (MeRIP) es un método para monitorear el estado de m6A y mapear la ubicación de las modificaciones del ARN m6A en todo el transcriptoma. El kit Magna MeRIP M6A utiliza el método MeRIP para permitir la identificación y el perfilado de todo el transcriptoma de las modificaciones del ARN m6A. En el ensayo MeRIP, el ARN se fragmenta químicamente en 100 nucleótidos o fragmentos más pequeños seguido de inmunoprecipitación magnética con un anticuerpo monoclonal hacia m6A. Después de la inmunoprecipitación, los fragmentos de ARN aislados pueden someterse a qRT-PCR o secuenciación de ARN (MeRIP-seq). El protocolo simplificado es fácil de procesar y puede producir resultados con altas razones SN.