Merck, 70015-3CN, Kit de clonación T7Select® 415-1

El sistema de visualización de fagos T7Select® de Novagen es un novedoso sistema que aprovecha las propiedades del bacteriófago T7. Este sistema es fácil de usar y permite visualizar péptidos de hasta aproximadamente 50 aminoácidos con un alto número de copias (415 por fago), así como péptidos o proteínas de hasta aproximadamente 1200 aminoácidos con un bajo número de copias (0,1-1 por fago) o intermedio (5-15 por fago). El ensamblaje del fago tiene lugar en el citoplasma de E. coli y los fagos maduros se liberan por lisis celular. A diferencia de los sistemas filamentosos, los péptidos o proteínas que se muestran en la superficie de T7 no necesitan secretarse a través de la membrana celular, un paso necesario para el ensamblaje del fago filamentoso. T7 posee propiedades adicionales que lo convierten en un vector de visualización atractivo. Es muy fácil de cultivar y se replica más rápidamente que el bacteriófago 1 o el fago filamentoso. Las placas se forman en 3 h a 37 °C y los cultivos se lisan entre 1 y 2 h después de la infección, lo que reduce el tiempo necesario para realizar las múltiples rondas de crecimiento que suelen requerirse para la selección. La partícula del fago T7 es extremadamente robusta y estable en condiciones adversas que inactivan otros fagos. Esta estabilidad amplía la variedad de agentes que se pueden utilizar en los procedimientos de selección por biopanning, que requieren que el fago mantenga su capacidad infectiva. T7 es un excelente vector de clonación general. El ADN purificado es fácil de obtener en grandes cantidades; se ha demostrado un sistema de empaquetamiento in vitro de alta eficiencia (2); y el ADN está completamente secuenciado (39 937 pb), por lo que el análisis de secuencias de restricción o de ADN de clones es bastante sencillo. El sistema de visualización de fagos T7Select utiliza la proteína de la cápside T7 para mostrar péptidos o proteínas en la superficie del fago. La proteína de la cápside se produce normalmente en dos formas: 10A (344 aa) y 10B (397 aa). 10B se produce por un desplazamiento del marco de lectura de la traducción en el aminoácido 341 de 10A y normalmente constituye aproximadamente el 10% de la proteína de la cápside. Sin embargo, las cápsides funcionales pueden estar compuestas completamente de 10A o 10B, o de diversas proporciones de las proteínas. Este hallazgo proporcionó la sugerencia inicial de que la cubierta de la cápside T7 podría acomodar la variación, y que la región de la proteína de la cápside exclusiva de 10B podría estar en la superficie del fago y podría usarse para la visualización en fagos. Existen tres tipos básicos de vectores de visualización en fagos T7Select: el vector T7Select415 para la visualización de péptidos con un alto número de copias, el vector T7Select10 para la visualización de péptidos con un número de copias medio o proteínas más grandes, y los vectores T7Select1 para la visualización de péptidos con un bajo número de copias o proteínas más grandes. En todos los vectores, las secuencias codificantes de los péptidos o proteínas que se van a mostrar se clonan en una serie de sitios de clonación múltiples, siguiendo el aa 348 de la proteína 10B. Se ha eliminado el sitio de desplazamiento del marco de lectura de la traducción natural dentro del gen de la cápside, por lo que solo se produce una única forma de proteína de la cápside a partir de estos vectores.