Merck, AL0103050, Kit de expresión de proteínas libres de células ALiCE® (lisado de células vegetales)

Los sistemas de expresión de proteínas acelulares (CFPE) derivados de extractos celulares crudos se han utilizado durante décadas como herramienta de investigación y han aportado numerosas ventajas a la tecnología de expresión de proteínas. Sin embargo, un obstáculo crítico para la adopción de los sistemas CFPE como alternativa a los enfoques basados ​​en células ha sido el problema de los rendimientos proteicos relativamente bajos. Para abordar este problema, se creó ALiCE®, un novedoso sistema de expresión acelular eucariota que aprovecha la biología celular vegetal. ALiCE® ofrece rendimientos sin precedentes de hasta 3 mg/mL de proteína en modo por lotes. De este modo, permite superar las limitaciones de los sistemas hospedadores vivos y obtener proteínas difíciles de producir en cuestión de horas en lugar de semanas. ALiCE® utiliza lisados ​​de células de tabaco desprovistos de vacuolas. El sistema contiene todos los factores necesarios para la transcripción in vitro (ARN polimerasas, NTP) y las reacciones de traducción (ribosomas, factores de iniciación/elongación de la traducción, ARNt, etc.). Mediante un protocolo sencillo, tanto la transcripción como la traducción del ARN se realizan en un solo tubo (transcripción/traducción acoplada). Las reacciones se inician simplemente mezclando el ADN plasmídico con la mezcla de reacción ALiCE®. La excelente producción de proteínas de ALiCE® se basa en una expresión proteica altamente eficiente durante la reacción. Por lo tanto, recomendamos una duración de reacción de 48 h. ALiCE® se suministra con dos vectores de expresión, pALiCE01 y pALiCE02, que se utilizan según la proteína de interés. Estos vectores han sido especialmente diseñados para ofrecer una excelente producción de proteínas al utilizarse con el sistema de expresión ALiCE®. pALiCE01 se utiliza para la expresión en la fracción citosólica de ALiCE®. La expresión en los microsomas con pALiCE02 ofrece la posibilidad de expresar proteínas con modificaciones postraduccionales, como enlaces disulfuro.