New England Biolabs, B0303S, tampón de reacción de DNasa I

Categorías relacionadas Exonucleasas y endonucleasas no específicas,, Buffers Aplicaciones Clonación de ARN Especificación Componentes del buffer 1X Tris-HCl 10 mM MgCl2 2.5 mM CaCl2 0.5 mM pH 7.6 a 25 °C Preguntas frecuentes P: ¿Funcionará la DNasa I en los buffers NEB 1-4? R: Sí, pero no tan eficientemente. La DNasa I es una enzima dependiente del calcio, por lo que funciona mejor en su propio buffer que contiene cloruro de calcio. Se recomienda que incluso si está utilizando buffers NEB 1-4, también agregue buffer DNasa I o CaCl2 0.5 mM a la reacción. Además, a la DNasa I no le gusta la sal alta, como la contenida en el buffer NEB 3. Funciona menos eficientemente en el buffer 3, pero aún así dará una digestión del 50-75%. P: ¿Recomienda un paso de limpieza después de una reacción de DNasa I? R: Sí. Dependiendo de sus aplicaciones posteriores, recomendamos un paso de extracción con fenol/cloroformo para eliminar todos los restos de la enzima. El paso de inactivación térmica es suficiente para inactivar la enzima, pero no la eliminará por completo. P: ¿Puedo usar un inhibidor de ARNasa en mi reacción? R: Sí. Recomendamos hacerlo para evitar que la ARNasa interfiera en la reacción.