New England Biolabs, C1010S, muestreador de E. coli competente para clonación NEB®

¿No está seguro de qué cepa de clonación elegir? NEB Cloning Competent Categorías relacionadas Células competentes,, Clonación Cepas celulares competentes Aplicaciones Transformación Preguntas frecuentes P: ¿Por qué el biólogo sintético Chris Voigt del MIT eligió NEB 10-beta para el ensamblaje y clonación de ADN? R: ¿Puede una célula viva realizar cálculos? Al codificar circuitos en el ADN y transformarlos en un huésped bacteriano vivo, los organismos pueden manipularse para procesar señales ambientales y tener una función biológica alterada. Esta reutilización de la función biológica es la piedra angular de la biología sintética y está transformando mercados como los biocombustibles y la industria alimentaria mediante la ingeniería de nuevos organismos diseñados para la fabricación o la detección biológica. Lograr esto requiere un ensamblaje confiable de grandes construcciones de ADN con disposiciones específicas de partes de ADN y un organismo bien caracterizado en el que colocarlas. El diseño de grandes construcciones de ADN es complejo y el ensamblaje puede ser un desafío formidable. Chris Voigt, un biólogo sintético del Broad Institute, y su equipo desarrollaron un entorno computacional (Cello) para estandarizar el diseño de estos ensamblajes basándose en parámetros y restricciones proporcionados por el usuario. Como señalan Voigt y su equipo, el comportamiento de los circuitos genéticos depende de muchas partes cuya función puede variar dependiendo del contexto genético, la cepa y las condiciones de crecimiento. Cuando llegó el momento de seleccionar una cepa celular competente, eligieron NEB 10-beta E. coli competente. ¿Por qué se eligió NEB 10-beta para Cello? Recombinación reducida por la mutación RecA1 Capacidad para clonar y propagar plásmidos grandes Alta eficiencia de transformación Mejor crecimiento en M9 + glucosa que algunas otras cepas Resistente al fago T1 Genotipo definido Ya se utiliza en muchos laboratorios de todo el mundo P: ¿Cómo deben prepararse los fragmentos para el ensamblaje utilizando NEBuilder HiFi? A: Los fragmentos se pueden preparar mediante los siguientes métodos: Los fragmentos generados por PCR se pueden limpiar utilizando la columna Monarch PCR o el kit Exo-CIP Rapid PCR Cleanup si la pureza del amplicón es superior al 95 %. Si se utilizó ADN plasmídico como plantilla durante la PCR, se puede eliminar mediante tratamiento con DpnI si es necesario. Si se observan múltiples bandas, recomendamos optimizar la PCR. Si esto no es posible, se recomienda la purificación en gel. La extracción en gel puede introducir tiocianato de guanidina (del tampón de disolución), lo que puede reducir la eficiencia de la reacción de ensamblaje. Para minimizar esta contaminación, recorte el corte de gel para que se pueda utilizar una menor cantidad de tampón de disolución en gel. La digestión con enzimas de restricción de un plásmido se puede realizar seguida de inactivación por calor o purificación en columna. Los fragmentos ordenados comercialmente se pueden resuspender en agua sin nucleasas o tampón TE y utilizar directamente en la reacción de ensamblaje.