New England Biolabs, E1050S, Kit de limpieza rápida de PCR Exo-CIP™

Categorías relacionadas PCR y limpieza de ADN,, Aplicaciones de purificación de ácidos nucleicos PCR y limpieza de reacción,, Amplificación de ADN, PCR y qPCR FAQ P: ¿Tengo que purificar mi amplicón de PCR después de la limpieza? R: No, los amplicones de PCR tratados con Exo-CIP están inmediatamente listos para aplicaciones posteriores sin necesidad de procesamiento adicional. P: ¿Cómo debo almacenar mis muestras tratadas después de la reacción de limpieza enzimática? R: Recomendamos almacenar las muestras tratadas a -20 °C para garantizar que la PCR polimerasa permanezca inactiva. P: ¿Por qué las lecturas de mi secuencia son menores de 600 bases incluso cuando el electroferograma se ve bien? R: Esto podría ser el resultado de enviar demasiada muestra para secuenciación y sobrecargar la química del terminador BigDye™. Asegúrese de que la muestra enviada esté entre 15-200 fmol en un volumen de 3 µl. Esto corresponde a las siguientes cantidades de masa: Tamaño del amplicón de PCR ng de ADN (en muestra de 3 ul) 100 pb 1 - 12 500 pb 5 - 60 1000 pb 10 - 120 3000 pb 30 - 360 5000 pb 50 - 600 P: ¿Por qué veo dos picos (uno grande y uno pequeño) superpuestos en una posición del electroferograma? R: Este fenómeno puede explicarse por una de las dos posibilidades siguientes. La primera es que se amplificó más de un tamaño de producto de PCR. Si la amplificación no produce un producto homogéneo y se amplifica más de una especie con similitud de secuencia con otra, ambas pueden secuenciarse con los cebadores de secuenciación añadidos. Otra explicación puede ser que quedó muestra sin procesar en el lateral del tubo de reacción, lo que produjo lecturas aberrantes. Asegúrese de agitar en vórtex y centrifugar rápidamente el tubo de reacción después del tratamiento con los reactivos Exo-CIP. P: ¿Es mi mezcla maestra/tampón de PCR compatible con el kit de limpieza rápida de PCR Exo-CIP? R: No es necesario cambiar el tampón ni añadir aditivos. El kit de limpieza rápida de PCR Exo-CIP ha sido probado para comprobar su compatibilidad con las siguientes mezclas maestras y tampones. Además, se espera que los tampones habituales que se incluyen con los productos típicos basados ​​en Taq de numerosos proveedores también sean compatibles con este producto. Si se observan interferencias (debido a la presencia de potenciadores de PCR, etc.), diluya el volumen final del producto de PCR con un volumen igual de agua sin nucleasas antes de la limpieza con Exo-CIP. ADN polimerasa de alta fidelidad Q5® ADN polimerasa de alta fidelidad Q5® Hot Start Mezcla maestra 2X de alta fidelidad Q5® Hot Start Mezcla maestra 2X de alta fidelidad Q5® NEBNext® Mezcla maestra PCR HiFi Q5® Hot Start NEBNext® Ultra™ II Mezcla maestra Q5® Mezcla maestra 2X Phusion® Hot Start Flex Mezcla maestra 2X OneTaq® Hot Start Quick-Load® con tampón estándar Mezcla maestra 2X OneTaq® Hot Start Quick-Load® con tampón GC Mezcla maestra 2X Taq Mezcla maestra 2X LongAmp® Taq ADN polimerasa con tampón Taq estándar ADN polimerasa Taq con tampón Thermopol® ADN polimerasa Phire™ Hot Start II ADN polimerasa Phire™ Hot Start II con DMSO ADN polimerasa Platinum™ SuperFi™ Kit de PCR Phire™ Plant Direct Tampón PCR HiFi Fidelity Kapa™ Kapa™ Tampón GC de PCR HiFi Kapa™ HiFi HotStart Ready Mix PrimeSTAR® GXL ADN polimerasa Terra™ PCR Direct