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BRAND / VENDOR: New England Biolabs

New England Biolabs, E1604L, kit de WGA phi29-XT

CATALOG NUMBER: E1604L
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Product Description
Categorías relacionadas Amplificación isotérmica y aplicaciones de desplazamiento de hebra Amplificación del genoma completo, Preguntas frecuentes sobre amplificación isotérmica P: ¿Cómo puedo aumentar el rendimiento de WGA al utilizar el kit phi29-XT WGA (NEB n.º E1604)? R: Se puede obtener un mayor rendimiento del producto WGA aumentando el volumen de reacción, el tiempo de incubación o la cantidad de ADN de entrada. Tenga en cuenta que aumentar el tiempo de incubación puede dar lugar a una mayor amplificación de productos no específicos en ausencia de plantilla. P: ¿En qué rango de temperatura se puede utilizar el kit phi29-XT WGA (NEB n.º E1604)? R: El rango óptimo de temperatura de reacción es de 40 a 42 °C. No se recomienda la amplificación con este kit a temperaturas inferiores a 37 °C ni superiores a 43 °C. P: ¿Cuál es la diferencia entre el kit phi29-XT WGA (NEB n.° E1604) y el kit phi29-XT RCA (NEB n.° E1603)? R: La ADN polimerasa phi29-XT es eficaz para amplificar ADN circular mediante Amplificación por Círculo Rodante (RCA), así como ADN genómico mediante Amplificación por Desplazamiento Múltiple (MDA). Sin embargo, la polimerasa phi29-XT incluida en el kit phi29-XT WGA (NEB n.° E1604) ha sido formulada para reducir el sesgo de GC durante la amplificación de ADN genómico humano. Para la RCA, sugerimos utilizar el kit phi29-XT RCA (NEB n.° E1603). P: ¿Es el kit phi29-XT WGA (NEB n.° E1604) adecuado para la amplificación de fragmentos cortos de ADN? R: El kit phi29-XT WGA utiliza la amplificación por desplazamiento múltiple (MDA), que es más adecuada para fragmentos largos de ADN, ya que la eficiencia de la amplificación disminuye al disminuir la longitud de la plantilla del material de partida. P: Al utilizar el kit phi29-XT WGA (NEB n.° E1604), ¿es necesario purificar los productos de WGA antes de su uso posterior? R: Normalmente, los productos de WGA se pueden utilizar directamente en aplicaciones posteriores sin necesidad de purificación. Muchas aplicaciones posteriores solo requieren la dilución de los productos de WGA antes de su uso. Si es necesaria la purificación, los productos de WGA se pueden purificar con microesferas SPRI® 0,6X, siguiendo las recomendaciones del fabricante. P: ¿Cómo cuantifico los productos de WGA generados con el kit phi29-XT WGA (NEB n.° E1604)? R: Los productos de WGA se pueden cuantificar directamente con el kit de ensayo Quant-iT® PicoGreen® dsDNA o con un fluorómetro Qubit® tras la dilución hasta el rango de detección adecuado. Como alternativa, los productos WGA purificados se pueden cuantificar midiendo la absorbancia a 260 nm o con NanoDrop®. P: Al utilizar el kit phi29-XT WGA (NEB n.º E1604), ¿se puede aumentar o reducir el volumen de reacción? R: Sí, el volumen de reacción se puede reducir a 10 µl y aumentar a 50 µl desde los 20 µl recomendados. Es posible un mayor escalamiento, pero no se ha probado. P: ¿Es el kit phi29-XT WGA (NEB n.º E1604) adecuado para la amplificación de ADN de células individuales? R: Sí, el kit phi29-XT WGA se recomienda para la amplificación de ADN de células individuales. Para células con paredes celulares gruesas (p. ej., células vegetales), puede ser necesaria la lisis celular para liberar el ADN antes del paso de desnaturalización. P: ¿Necesito extraer ADN de células completas antes de usar el kit phi29-XT WGA (NEB n.° E1604)? R: Para células que se lisan fácilmente, el paso de desnaturalización del ADN incluido en el protocolo del kit phi29-XT WGA es suficiente. Sin embargo, para células difíciles de lisar, la extracción de ADN puede ser beneficiosa. El kit de extracción de ADNg Monarch® Spin (NEB n.° T3010) permite extraer ADN de una amplia gama de muestras, como células, sangre, tejido, bacterias, levaduras, saliva e hisopos.

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