New England Biolabs, E2040S, Kit de síntesis de ARN de alto rendimiento HiScribe® T7

Ahora incluye un tubo separado de DTT Categorías relacionadas Capping de ARN,, Síntesis de sgRNA,, Síntesis de ARN Transcripción in vitro (IVT), Especificación Materiales necesarios pero no suministrados Agua libre de nucleasas (NEB #B1500) Preguntas frecuentes P: ¿Puedo usar los kits de limpieza de ARN Monarch Spin para limpiar mi reacción de transcripción in vitro (IVT)? R: Sí, el kit de limpieza de ARN Monarch Spin (50 µg) (NEB #T2040) es adecuado para limpiar reacciones de transcripción in vitro donde no se espera que el rendimiento exceda los 50 µg. Si se espera que el rendimiento de ARN de una transcripción in vitro exceda los 50 µg, recomendamos dividir la reacción entre varias columnas de limpieza de ARN Monarch Spin (50 µg) o limpiarla usando el kit de limpieza de ARN Monarch Spin (500 µg) (NEB #T2050), debido a la mayor capacidad de unión del ARN. P: ¿Cómo puedo mejorar un bajo rendimiento de ARN en la reacción de transcripción? R: Si la reacción de transcripción con su plantilla genera ARN completo, pero el rendimiento es significativamente menor al esperado, es posible que contaminantes en la plantilla de ADN estén inhibiendo la ARN polimerasa o que la concentración de ADN sea incorrecta. Alternativamente, podría requerirse una purificación adicional de la plantilla de ADN. Añadir 5 mM de DTT (final) a la reacción de transcripción también puede ayudar a mejorar el rendimiento de ARN. P: ¿El kit incluye nucleótidos modificados? R: Los nucleótidos modificados no están incluidos en el kit, pero se pueden adquirir por separado. NEB puede proporcionar N1-Metil-Pseudouridina-5'-Trifosfato (NEB n.° N0431), 5-Metil-Citidina-5'-Trifosfato (NEB n.° N0432), Pseudouridina-5'-Trifosfato (NEB n.° N0433) y 5-Metoxi-Uridina-5'-Trifosfato (NEB n.° N0434). El manual del kit incluye un protocolo detallado para el uso de nucleótidos modificados en la reacción de transcripción. P: ¿Es necesario añadir DTT a la reacción? R: Añadir DTT (5 mM final) a la reacción es opcional, pero se recomienda. La ARN polimerasa del kit es sensible a la oxidación y podría reducir la producción de ARN con el tiempo debido a la manipulación repetida, etc. Añadir DTT a la reacción puede ayudar a restaurar el rendimiento del kit en estos casos. Añadir DTT no afectará la reacción en ningún caso.