New England Biolabs, E5200S, Kit de PCR LongAmp® Taq

Rendimiento excepcional con amplicones largos Categorías relacionadas ADN polimerasas LongAmp® Aplicaciones PCR de largo alcance,, PCR especializada,, PCR de rutina, Preguntas frecuentes P: ¿Cuál es la cantidad de enzima recomendada cuando se utiliza la ADN polimerasa LongAmp™ Taq? R: En general, recomendamos 5 unidades de ADN polimerasa LongAmp Taq en una reacción de PCR de 50 µl. Para amplicones < 8 kb, recomendamos 1–2,5 unidades por reacción de PCR de 50 µl para una mayor fidelidad. P: ¿Puede llevarse a cabo el paso de extensión a 72 °C cuando se utiliza la ADN polimerasa LongAmp™ Taq? R: Sí, la ADN polimerasa LongAmp Taq puede utilizarse a 72 °C. Sin embargo, la extensión a 65–68 °C es una mejor opción para la mayoría de los amplicones. P: ¿Cuál es la velocidad de extensión cuando se utiliza la ADN polimerasa LongAmp™ Taq? R: Recomendamos 50 segundos por kb para obtener los máximos rendimientos. Velocidades de extensión tales como 30 segundos por kb pueden usarse para objetivos de hasta 4 kb usando un protocolo de PCR de 3 pasos. Velocidades de extensión más cortas tales como 15 segundos por kb pueden usarse para objetivos de hasta 2 kb usando un protocolo de PCR de 3 pasos en una máquina de PCR rápida. P: ¿Por qué el producto es una mancha cuando se visualiza en un gel de agarosa? R: Cuando las condiciones de PCR no son óptimas, a menudo se observa una mancha o un alto nivel de fondo. Pruebe una o más de las siguientes sugerencias: use una cantidad menor de enzima use 65 °C para la extensión aumente la temperatura de annealing pruebe protocolos de ciclado de 2 pasos P: ¿Puede usarse el kit LongAmp™ para amplificar amplicones ricos en GC? R: Sí. La adición de DMSO hasta un 10% ayuda a amplificar amplicones ricos en GC. P: ¿Qué tipo de extremos de ADN resultan de una reacción de extensión de cebador o una PCR usando LongAmp™ Taq ADN polimerasa? R: La mayoría de los productos de PCR generados con la ADN polimerasa LongAmp Taq contienen salientes dA en el extremo 3'; por lo tanto, pueden ligarse a vectores con salientes dT/dU. P: ¿Cuál es la fidelidad de la ADN polimerasa LongAmp™ Taq en comparación con la ADN polimerasa Taq? R: La ADN polimerasa LongAmp Taq ofrece una fidelidad dos veces mayor que la ADN polimerasa Taq. P: ¿Puede la mezcla maestra NEBuilder® HiFi DNA Assembly eliminar los desajustes en los extremos 3' y 5'? R: Sí, NEB HiFi puede eliminar estos desajustes hasta 10 pb del extremo, lo que permite que los extremos del ADN se analicen sin el saliente.