New England Biolabs, E6300L, Kit de síntesis de ADNc de primera cadena ProtoScript®

El kit de síntesis de ADNc de primera cadena ProtoScript contiene todo lo necesario para la síntesis de ADNc. Categorías relacionadas: RT-PCR, Síntesis de ADNc y transcriptasas inversas , Aplicaciones, Síntesis de ADNc, Transcripción inversa (síntesis de ADNc), RT-PCR y síntesis de ADNc, Preguntas frecuentes. P: ¿Cómo elijo entre el kit LunaScript® RT SuperMix y los kits de síntesis de ADNc de primera cadena ProtoScript? R: Los kits de síntesis de ADNc de primera cadena contienen diferentes transcriptasas inversas, cuyas principales diferencias residen en sus aplicaciones principales, formato y temperatura de reacción. A continuación, se presenta un resumen de nuestros tres kits de síntesis de ADNc de primera cadena. Producto Kit LunaScript RT SuperMix (E3010) Kit de síntesis de ADNc de primera hebra ProtoScript II (E6560) Kit de síntesis de ADNc de primera hebra ProtoScript (E6300) Transcriptasa inversa RT Luna Transcriptasa inversa ProtoScript II Transcriptasa inversa M-MuLV Formato Supermix Mezcla de reacción, mezcla de enzimas, cebador Mezcla de reacción, mezcla de enzimas, cebador Aplicación primaria RT-qPCR de dos pasos RT-PCR de punto final hasta 10 kb RT-PCR de punto final hasta 5 kb Aplicación secundaria RT-PCR de punto final hasta 3 kb RT-qPCR de dos pasos RT-qPCR de dos pasos Temperatura de reacción Hasta 65 °C (55 °C óptimo) Hasta 48 °C (42 °C óptimo) Hasta 45 °C (42 °C óptimo) Entrada de ARN 1 μg a 1 pg 1 μg a 1 pg 1 μg a 1 pg Incubación 25 °C 2 min, 55 °C 10 min, 95 °C 1 min 25 °C 5 min, 42 °C 60 min, 85 °C 5 min 25 °C 5 min, 42 °C 60 min, 85 °C 5 min Características adicionales Tinte de seguimiento azul, protocolo rápido de 13 min P: ¿Por qué obtengo un bajo rendimiento de ADNc? R: Hay varias posibilidades: Compruebe la integridad del ARN mediante electroforesis en gel de agarosa desnaturalizante (2). El ARN debe tener una relación mínima A260/A280 de 1,7 o superior. La precipitación con etanol seguida de un lavado con etanol al 70 % puede eliminar la mayoría de los contaminantes, como EDTA y guanidinio. La precipitación con cloruro de litio puede eliminar polisacáridos (2). La extracción con fenol/cloroformo y la extracción con etanol pueden eliminar proteínas contaminantes, como las proteasas (2). Algunos ARN diana pueden contener pausas intensas para la RT; Utilice cebado aleatorio en lugar de d(T)23VN. Use suficiente ARN.