New England Biolabs, M0206L, Exonucleasa III (E. coli)

Categorías relacionadas Exonucleasas y endonucleasas no específicas Aplicaciones Polimerasas para manipulación de ADN Especificación Unidad Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para producir 1 nmol de nucleótido total soluble en ácido en un volumen de reacción total de 50 μl en 30 minutos a 37 °C en 1X NEBuffer 1 con 0,15 mM de dúplex sonicado [3H]-ADN. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ 1 Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ 1 10 mM Bis-Tris-Propano-HCl 10 mM MgCl2 1 mM DTT (pH 7 a 25 °C) Tampón de almacenamiento 5 mM KPO4 200 mM KCl 5 mM β-ME 0,05 mM EDTA 200 µg/ml BSA 50 % glicerol pH 6,5 a 25 °C Inactivación por calor 70 °C durante 20 minutos Actividad específica 150 000 unidades/mg Preguntas frecuentes P: ¿Cuál es la actividad de la exonucleasa III M0206 en varios tampones NEB? R: La actividad de la exonucleasa III en varios tampones se detalla a continuación: NEBuffer 1 - 100% NEBuffer 2 - 75% NEBuffer 3 -25% NEBuffer 4 - 75% CutSmart – 100% P: ¿En qué se diferencia la exonucleasa T5 de la exonucleasa III (NEB# M0206)? R: La exonucleasa III actúa en la dirección 3' a 5', opuesta a la de la exonucleasa T5, que actúa en la dirección 5' a 3'. P: ¿En qué se diferencia la exonucleasa T7 de la exonucleasa III (NEB# M0206)? R: La exonucleasa III actúa en la dirección 3' a 5', opuesta a la de la exonucleasa T7 y la exonucleasa Lambda. P: ¿Funcionará la exonucleasa III en el tampón rCutSmart? R: La exonucleasa III funcionará en el tampón rCutSmart. Para ver su porcentaje de actividad funcional en rCutSmart y la de otras enzimas modificadoras de ADN en el flujo de trabajo de clonación, consulte la tabla de actividad de las enzimas modificadoras de ADN en el tampón rCutSmart®. P: ¿Se puede usar la exonucleasa I con una exonucleasa bicatenaria para limpiar preparaciones de plásmidos? R: La exonucleasa I se puede usar con la exonucleasa Lambda (NEB# M0262) para limpiar preparaciones de plásmidos. La exonucleasa III (NEB# M0206) y la exonucleasa T7 (NEB# M0263) también funcionan, pero dañarán los plásmidos mellados. Aunque se puede utilizar la exonucleasa I, recomendamos utilizar la exonucleasa V (RecBCD) (NEB n.° M0345) para eliminar el ADN cromosómico después de la preparación del plásmido (consulte nuestra Nota de aplicación: Uso de la exonucleasa V (RecBCD) para eliminar el ADN genómico residual al purificar plásmidos de bajo número de copias con el kit Monarch® Plasmid Miniprep).