New England Biolabs, M0239S, ARN ligasa T4 2 (ARN bicatenario ligasa)

La ARN ligasa T4 2 liga las muescas en el ARN bicatenario y también puede utilizarse para ligar el extremo 3'-OH del ARN al extremo 5'-fosfato del ADN en una estructura bicatenaria. Categorías relacionadas: Ligadura de ARN. Unidad de especificación. Definición: Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para ligar 0,4 µg de una mezcla equimolar de ARN de 23 y 17 meros en un volumen total de reacción de 20 μl en 30 minutos a 37 °C. Condiciones de reacción Tampón de reacción 1X T4 Rnl2 Incubar a 37 °C Tampón de reacción 1X T4 Rnl2 Tris-HCl 50 mM MgCl2 2 mM DTT 1 mM ATP 400 µM (pH 7,5 a 25 °C) Tampón de almacenamiento Tris-HCl 10 mM KCl 50 mM (NH4)2SO4 35 mM DTT 0,1 mM EDTA 50 % glicerol pH 7,5 a 25 °C Inactivación por calor 80 °C durante 5 minutos Actividad específica 40 000 unidades/mg Unidad Condiciones del ensayo Tampón de reacción 1X T4 Rnl2 y 0,4 μg de una mezcla equimolar de ARN de 23 y 17 meros. Tras la incubación a 37 °C durante 30 minutos, el producto ligado se detecta en un gel de poliacrilamida al 15 %. Preguntas frecuentes P: ¿Cómo puedo lograr una ligadura óptima de un oligonucleótido de ssDNA fosforilado en 5' al extremo 3' de un sustrato de ssRNA con una férula de ssDNA o ssRNA utilizando la ARN ligasa T4 2? R: El tampón de reacción incluido con esta enzima está optimizado para la ligadura de mellas en dsRNA. Para optimizar la ligadura de mellas en híbridos de ADN/ARN, recomendamos aumentar la concentración de magnesio de 2 mM a 10 mM en la reacción. La adición de un 10-15 % de PEG8000 a la reacción final aumentará aún más la eficiencia de la ligadura. El tampón actual es bueno para la ligadura de mellas en dsRNA, pero no para la ligadura de mellas en híbridos de ADN/ARN. P: ¿Cuál es la tolerancia a la sal de esta ARN ligasa? A: NEB # Tolerancia a la sal de la ligasa de ARN M0204 T4 ARN ligasa 1 (ligasa de ARNmc) ≤ 50 mM M0239 T4 ARN ligasa 2 (ligasa de ARNdc) ≤ 50 mM M0242 T4 ARN ligasa 2, truncada ≤ 100 mM M0351 T4 ARN ligasa 2, truncada K277Q ≤ 100 mM M0373 T4 ARN ligasa 2, truncada KQ ≤ 100 mM M0375 SplintR Ligasa ≤ 50 mM E2610 Kit de adenilación 5' (ligasa Mth) ≤ 300 mM M0319 Ligasa de ADN/ARN termoestable 5' App ≤ 50 mM