Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, M0240L, Fpg

Categorías relacionadas Enzimas de reparación de ADN y endonucleasas específicas de estructura Aplicaciones Polimerasas para manipulación de ADN Especificación Unidad Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para escindir 10 pmol de un dúplex de oligonucleótido de 34 meros que contiene una única base de 8-oxoguanina emparejada con una citosina en un volumen de reacción total de 10 μl en 1 hora a 37 °C. Condiciones de reacción: 1X NEBuffer™ 1, suplementado con 100 µg/ml de albúmina recombinante, grado de biología molecular. Incubar a 37 °C. 1X NEBuffer™ 1, 10 mM de Bis-Tris-Propano-HCl, 10 mM de MgCl₂, 1 mM de DTT (pH 7 a 25 °C). Dilución para el ensayo Comet. Dilución recomendada para el ensayo Comet: 1:10⁻¹ a 1:10⁻¹ (4, 5, 6). Para consultar el protocolo, visite: http://cometassay.com. Tampón de almacenamiento Tris-HCl 20 mM NaCl 50 mM EDTA 0,5 mM BSA 200 µg/ml Glicerol al 50 % pH 8 a 25 °C Inactivación por calor 60 °C durante 10 minutos Preguntas frecuentes P: ¿Cuál es la actividad de Fpg en los NEBuffers 1-4? R: Fpg tiene una actividad del 100 % en los NEBuffers 1, 2 y 4. Tiene una actividad del 75 % en el NEBuffer 3. P: ¿Fpg escinde el hidroximetiluracilo? R: No. Fpg no escinde el hidroximetiluracilo. P: ¿Fpg corta solo una hebra o causa una rotura de doble hebra? R: Fpg corta la hebra que contiene el daño. Si hay daño en ambas hebras, entonces cortará ambas. P: ¿Cuál es el peso molecular de Fpg? A: El peso molecular de Fpg es de 30 kDa. P: ¿Cuál es la diferencia entre usar Fpg y hOOG1? R: hOGG1 corta el enlace 3' a la base modificada. Esto deja una muesca y la base modificada en el sustrato de ADN. Fpg tiene la misma especificidad básica de sustrato, pero corta 5' y 3' a la base modificada. La base modificada flota y el ADN queda con un espacio donde solía estar la base modificada. P: ¿El Fpg contiene una etiqueta? R: La proteína Fpg que vende NEB no tiene una etiqueta. P: ¿Qué tampón funcionará tanto con la Endonucleasa III como con Fpg? R: Cualquier NEBuffer 1-4 funcionará para ambas enzimas. P: ¿En qué sustrato se prueba Fpg? R: El sustrato utilizado para probar Fpg se describe en la definición de la unidad. Es un dúplex de oligonucleótidos de 34 meros que contiene una sola base de 8-oxoguanina emparejada con una citosina. P: ¿Cuál es la actividad de Fpg en el tampón rCutSmart? R: Fpg tiene una actividad del 100 % en el tampón rCutSmart. Consulte la actividad de las enzimas modificadoras de ADN en el tampón rCutSmart™ para conocer la actividad de otras enzimas en el tampón rCutSmart.