New England Biolabs, M0242L, ARN ligasa T4 2, truncada

Categorías relacionadas Aplicaciones de ligadura de ARN Especificación de clonación de ARN Definición de unidad 200 unidades se definen como la cantidad de enzima necesaria para dar una ligadura del 80 % de un ARN de 31 meros al extremo preadenilado de un ADN de 17 meros Universal miRNA Cloning Linker (#S1315) en un volumen de reacción total de 20 μl en 1 hora a 25 °C. 5´-FAM-rArGrUrCrGrUrArGrCrCrUrUrUrArUrCrCrGrArGrArUrUrCrArGrCrArArUrA-3´ 5´-rAppCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3´ Molaridad = 14 μM Condiciones de reacción Tampón de reacción de la ligasa de ARN T4 1X Incubar a 25 °C Tampón de reacción de la ligasa de ARN T4 1X 50 mM Tris-HCl 10 mM MgCl2 1 mM DTT (pH 7,5 a 25 °C) Tampón de almacenamiento 10 mM Tris-HCl 100 mM NaCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 50 % glicerol pH 7,5 a 25 °C Inactivación por calor 65 °C para 20 minutos Unidad Condiciones de ensayo 1X T4 ARN ligasa tampón de reacción suplementado con 10% (p/v) PEG MW 8000, 20 pmol de ARN marcado con 5'-FAM y 40 pmol de enlazador de ADN preadenilado. Después de la incubación a 25°C durante 1 hora, el producto ligado se detecta en un gel de poliacrilamida desnaturalizante al 15%. Preguntas frecuentes P: ¿Cómo puedo aumentar la eficiencia de la ligadura? R: En general, el aumento del tiempo de reacción, la reducción de la temperatura de reacción y el hacinamiento molecular producen reacciones de ligadura más completas. Los tiempos de reacción se pueden aumentar hasta 24 horas o más. Para ligaduras de más de 2 horas, incubamos rutinariamente por debajo de 16°C. Algunos científicos informan de la ligadura en hielo (0°C) durante 24 horas. Recomendamos el uso de PEG 4000 u 8000 hasta el 15% (p/v). Aumentar aún más las concentraciones de PEG no aumentó la eficiencia de la ligadura. P: ¿Está disponible para la compra PEG 8000? R: PEG 8000 se incluye como un componente del tampón de reacción de la ARN ligasa T4 (NEB n.º B0216). P: ¿Cuál es la tolerancia a la sal de esta ARN ligasa? R: N.º de NEB ARN ligasa Tolerancia a la sal M0204 ARN ligasa 1 T4 (ssRNA ligasa) ≤ 50 mM M0239 ARN ligasa 2 T4 (dsRNA ligasa) ≤ 50 mM M0242 ARN ligasa 2 T4, truncada ≤ 100 mM M0351 ARN ligasa 2 T4, truncada K277Q ≤ 100 mM M0373 ARN ligasa 2 T4, truncada KQ ≤ 100 mM M0375 Ligasa SplintR ≤ 50 mM E2610 Kit de adenilación 5' (ligasa Mth) ≤ 300 mM M0319 Ligasa de ADN/ARN termoestable 5' App ≤ 50 mM