Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, M0249L, RecA

RecA es necesaria para reacciones de recombinación genética que involucran reparación de ADN y mutagénesis inducida por UV Categorías relacionadas Proteínas de unión a ssADN, Enzimas de reparación de ADN y endonucleasas específicas de la estructura Especificación Condiciones de reacción Tampón de reacción Rec A 1X Incubar a 37 °C Tampón de reacción Rec A 1X Tris-HCl 70 mM MgCl2 10 mM DTT 5 mM (pH 7,6 a 25 °C) Concentración de uso 2 mg/ml Tampón de almacenamiento Tris-HCl 10 mM EDTA 0,1 mM DTT 1 mM Glicerol al 50 % pH 7,4 a 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 20 minutos Preguntas frecuentes P: ¿Qué tampón se debe usar con la proteína RecA? R: El tampón RecA suministrado se puede usar para formar triples hélices estables cuando se complementa con ATP gamma-S. No se suministra ATP gamma-S. Se puede utilizar el producto Sigma (A1388) ATP gamma-S. Un tampón similar a varios publicados en la literatura científica, 25 mM Tris-acetato (pH 7,8), 4 mM Mg+2 acetato, 0,3 mM ATP gamma-S, 0,4 mM DTT, se ha utilizado con éxito con el ensayo funcional de RecA. P: ¿Es necesario magnesio para la formación de triple cadena utilizando la proteína RecA? R: Sí. P: ¿Es necesario ATP gamma-S para la formación de triple cadena utilizando la proteína RecA? R: Sí. El ATP gamma-S a una concentración de 0,3 mM estabilizará la triple hélice. No se suministra ATP gamma-S. Se puede utilizar el producto Sigma (A1388) ATP gamma-S. P: ¿Es importante la estructura del ADN diana cuando se utiliza la proteína RecA? R: Sí, los plásmidos superenrollados permiten la formación de una triple hélice estable (1). (1) Zhumabayeva, B., Chenchik, A. y Siebert, PD, Biotechniques 27:834-845, 1999. P: ¿Cuánta proteína RecA debe añadirse al ADN monocatenario para recubrirlo? R: La proporción sugerida es de 3 moles de bases por 1 mol de RecA. P: ¿Qué longitud de oligonucleótido monocatenario debe utilizarse con la proteína RecA? R: La longitud del oligonucleótido debe ser de al menos 30 nucleótidos y puede alcanzar los 60. El sitio que se va a bloquear debe estar en el centro del oligonucleótido.