New England Biolabs, M0262L, Exonucleasa Lambda

Categorías relacionadas Exonucleasas y endonucleasas no específicas Especificación Unidad Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para producir 10 nmol de desoxirribonucleótido soluble en ácido a partir de un sustrato de doble cadena en un volumen de reacción total de 50 μl en 30 minutos a 37 °C en tampón de reacción de exonucleasa Lambda 1X con 1 μg de dúplex sonicado [3H]-ADN. Condiciones de reacción Tampón de reacción de exonucleasa lambda 1X Incubar a 37 °C Tampón de reacción de exonucleasa lambda 1X Glicina-KOH 67 mM MgCl2 2,5 mM BSA 50 µg/ml (pH 9,4 a 25 °C) Concentración de uso 5000 unidades/ml Tampón de almacenamiento Tris-HCl 25 mM NaCl 50 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM Glicerol al 50 % pH 8 a 25 °C Inactivación por calor 75 °C durante 10 minutos Peso molecular Teórico: 28000 daltons Actividad específica 50 000 unidades/mg Preguntas frecuentes P: ¿Cuál es la actividad de la exonucleasa lambda M0262 en varios tampones NEB? R: La actividad de la lambda exonucleasa en varios tampones se detalla a continuación: NEBuffer 1 - 15% NEBuffer 2 - 40% NEBuffer 3 -10% NEBuffer 4 - 40% CutSmart – 50% Exonuclease I Reaction Buffer- 100% Thermopol Reaction Buffer -100% P: ¿En qué se diferencia la T5 exonucleasa de la lambda exonucleasa (NEB# M0262)? R: A diferencia de la lambda exonucleasa, la T5 exonucleasa puede degradar dsDNA circular mellado. La T5 exonucleasa también actúa sobre ssDNA, mientras que la lambda exonucleasa no lo hace. P: ¿En qué se diferencia la T7 exonucleasa de la lambda exonucleasa (NEB# M0262)? R: La T7 exonucleasa tiene incluso menos actividad sobre ADN monocatenario que la lambda exonucleasa, actúa en mellas a diferencia de la lambda exonucleasa y es menos procesiva. Dado que es menos procesiva, puede ser más útil para deleciones anidadas unidireccionales. La enzima se puede diluir para controlar la velocidad de reacción. Con una enzima altamente procesiva, como la Lambda Exonucleasa, la dilución da como resultado una mezcla de productos completamente digeridos y sustrato sin digerir. P: ¿La Lambda Exonucleasa funcionará en el tampón rCutSmart? R: La Lambda Exonucleasa funcionará en el tampón rCutSmart. Para ver su % de actividad funcional en rCutSmart y la de otras enzimas modificadoras de ADN en el flujo de trabajo de clonación, consulte la tabla de Actividad de Enzimas Modificadoras de ADN en el tampón rCutSmart®. P: ¿Se puede usar la Exonucleasa I con una exonucleasa bicatenaria para limpiar preparaciones de plásmidos? R: La Exonucleasa I se puede usar con la Lambda Exonucleasa (NEB# M0262) para limpiar preparaciones de plásmidos. La exonucleasa III (NEB# M0206) y la exonucleasa T7 (NEB# M0263) también son eficaces, pero dañarán los plásmidos con cortes. Si bien se puede utilizar la exonucleasa I, recomendamos usar la exonucleasa V (RecBCD) (NEB #M0345) para eliminar el ADN cromosómico después de la preparación del plásmido (consulte nuestra Nota de Aplicación: Uso de la exonucleasa V (RecBCD) para eliminar el ADN genómico residual al purificar plásmidos de bajo número de copias con el kit Monarch® Plasmid Miniprep).