Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, M0264S, RecJf

Categorías relacionadas Exonucleasas y endonucleasas no específicas Especificación Unidad Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para producir 0,05 nmol de desoxirribonucleótido soluble en TCA en un volumen de reacción total de 50 μl en 30 minutos a 37 °C en 1X NEBuffer 2 con 1,5 µg de ADN de E. coli monocatenario sonicado marcado con [3H]. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ 2 Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ 2 50 mM NaCl 10 mM Tris-HCl 10 mM MgCl2 1 mM DTT (pH 7,9 a 25 °C) Tampón de almacenamiento 10 mM Tris-HCl 50 mM KCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 200 µg/ml BSA 50 % Glicerol pH 7,4 a 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 20 minutos Preguntas frecuentes P: ¿Cuál es la actividad de RecJf en los NEBuffers? R: NEBuffer 1: 20 % NEBuffer 2: 100 % NEBuffer 3: 100 % NEBuffer 4: 100 % P: ¿Se puede despuntar el ADN utilizando RecJf? R: No, los extremos cortos de 4 pb o menos no son buenos sustratos. Use ADN Polimerasa I, Fragmento Grande (Klenow) (NEB# M0210) para rellenar los salientes de 5' (también llamados extremos cóncavos de 3') y reabsorber los salientes de 3', o use Nucleasa de Frijol Mung (NEB# M0250) para reabsorber los salientes de 3' o 5'. Nota: Los salientes de 3' no se pueden rellenar. P: ¿Cuál es la diferencia entre RecJf y la Exonucleasa I (NEB# M0293)? R: RecJf funciona de 5' a 3', a diferencia de la Exonucleasa I, que funciona de 3' a 5'. P: ¿Se puede inactivar RecJf por calor? R: Sí. Inactívelo por calor a 65 °C durante 20 minutos. P: ¿Funcionará RecJF en el tampón rCutSmart? R: Sí, RecJF funcionará en el tampón rCutSmart. Para ver su % de actividad funcional en rCutSmart y la de otras enzimas modificadoras de ADN en el flujo de trabajo de clonación, consulte la tabla Actividad de enzimas modificadoras de ADN en el tampón rCutSmart®.