New England Biolabs, M0268S, Endonucleasa III (Nth)

Categorías relacionadas Enzimas de reparación de ADN y endonucleasas específicas de la estructura Especificación Unidad Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para escindir 1 pmol de un dúplex de oligonucleótidos de 34 meros que contiene un único sitio AP* en un volumen de reacción total de 10 μl en 1 hora a 37 °C en tampón de reacción de endonucleasa III 1X que contiene 10 pmol de dúplex de oligonucleótidos marcado con fluorescencia. * Un sitio AP se crea tratando 10 pmol de un dúplex de oligonucleótidos de 34 meros que contiene un único residuo de uracilo con 1 unidad de uracil-ADN glicosilasa (UDG) durante 2 minutos a 37 °C. Condiciones de reacción Tampón de reacción 1X Endonucleasa III (Nth) Incubar a 37 °C Tampón de reacción 1X Endonucleasa III (Nth) Tris-HCl 20 mM EDTA 1 mM DTT (pH 8 a 25 °C) Concentración de uso 10 000 unidades/ml Tampón de almacenamiento Tris-HCl 10 mM NaCl 250 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM BSA 200 µg/ml Glicerol al 50 % pH 7,4 Inactivación por calor 65 °C durante 20 minutos Condiciones de ensayo de la unidad Tampón de reacción 1X Endonucleasa III (Nth) que contiene 10 pmol de dúplex de oligonucleótidos marcados con fluorescencia en un volumen de reacción total de 10 μl Preguntas frecuentes P: ¿Cuál es la actividad de la endonucleasa III en el tampón NE 1-4? R: La endonucleasa III es completamente activa en los cuatro tampones. P: ¿Cuál es el peso molecular de la endonucleasa III? R: El peso molecular de la endonucleasa III es de 23 kDa. P: ¿Qué tipos de bases dañadas reconoce y elimina la endonucleasa III? R: Algunas de las bases dañadas que reconoce y elimina la endonucleasa III son urea, 5, 6 dihidroxitimina, timina glicol, 5-hidroxi-5 metilhidantoina, uracil glicol, 6-hidroxi-5, 6-dihidroxitimina y metiltartronilurea. P: ¿Es la endonucleasa III una proteína marcada? R: No. La endonucleasa III no es una proteína marcada. P: ¿Qué sustrato se utiliza para evaluar la actividad de la endonucleasa III? R: Los sustratos utilizados para evaluar la actividad enzimática se describen en la definición de la unidad de cada enzima. Para la endonucleasa III, el sustrato utilizado es un dúplex de oligonucleótidos de 34 meros que contiene un solo sitio AP. P: ¿Funcionará la endonucleasa III en el tampón rCutSmart? R: Sí, la Endonucleasa III funciona en el tampón rCutSmart. Para ver su porcentaje de actividad funcional en rCutSmart y el de otras enzimas modificadoras de ADN en el proceso de clonación, consulte la tabla de Actividad de las Enzimas Modificadoras de ADN en el tampón rCutSmart®.