New England Biolabs, M0281S, inhibidor de la uracilo glicosilasa (UGI)

Categorías relacionadas: Enzimas reparadoras de ADN y endonucleasas de estructura específica. Unidad de especificación : Definición. Una unidad de UGI se define como la cantidad de proteína necesaria para inhibir una unidad de UDG de E. coli en una hora a 37 °C en un volumen total de reacción de 50 μl. Una unidad de UDG es la cantidad de enzima que cataliza la liberación de 60 pmol de uracilo por minuto a partir de ADN bicatenario con uracilo. Condiciones de reacción Tampón de reacción 1X UDG Incubar a 37 °C Tampón de reacción 1X UDG Tris-HCl 20 mM DTT 1 mM EDTA 1 mM (pH 8 a 25 °C) Tampón de almacenamiento Tris-HCl 10 mM KCl 50 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM 200 µg/ml BSA Glicerol al 50 % pH 7,4 a 25 °C Inactivación por calor 70 °C durante 10 minutos Preguntas frecuentes P: ¿Cuál es la naturaleza del inhibidor de la uracil glicosilasa? R: UGI es una proteína. P: ¿Cómo inhibe UGI a UDG? R: UGI es capaz de disociar complejos UDG-ADN. Se une a UDG con una estequiometría de 1:1. P: ¿UGI inhibe la actividad de todos los UDG? R: El UGI puede inhibir la actividad de la UDG de E. coli, así como la de las UDG de otras especies. Sin embargo, no puede inhibir la actividad de la UDG de Afu. P: ¿Cuál es el peso molecular del UGI? R: El UGI tiene un peso molecular de 9,5 kDa. P: ¿Por qué es necesario usar UGI en una reacción? R: La UDG permanece parcialmente activa tras el tratamiento térmico a 95 °C. Se puede añadir UGI a la reacción para evitar la degradación posterior del ADN del producto.