Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, M0282L, APE 1

Categorías relacionadas Reparación de ADN Enzimas y endonucleasas específicas de la estructura Aplicaciones Polimerasas para manipulación de ADN Especificación Unidad Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para escindir 20 pmol de un dúplex de oligonucleótidos de 34 meros que contiene un único sitio AP* en un volumen de reacción total de 10 μl en 1 hora a 37 °C. *Un sitio AP se crea tratando 20 pmol de un dúplex de oligonucleótidos de 34 meros que contiene un único residuo de uracilo con 1 unidad de uracil-ADN glicosilasa (UDG) durante 2 minutos a 37 °C. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ 4 Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ 4 50 mM de acetato de potasio 20 mM de Tris-acetato 10 mM de acetato de magnesio 1 mM de DTT (pH 7,9 a 25 °C) Tampón de almacenamiento 10 mM de Tris-HCl 50 mM de NaCl 1 mM de DTT 0,05 mM de EDTA 200 µg/ml de BSA 50 % de glicerol pH 8 a 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 20 minutos Condiciones del ensayo unitario 1X NEBuffer 4 que contiene 20 pmol de dúplex de oligonucleótidos marcados con fluorescencia en un volumen de reacción total de 10 μl. Preguntas frecuentes P: ¿Cuál es la actividad de APE 1 en NEBuffers 1-4? R: APE 1 tiene una actividad del 100 % en el NEBuffer 4 y del 50 % en el NEBuffer 1-3. P: ¿Cuál es el peso molecular de APE 1? R: El peso molecular de APE 1 es de aproximadamente 35 kDa. P: ¿Es APE 1 una proteína marcada? R: No. APE 1 no es una proteína marcada. P: ¿Qué sustrato se utiliza para analizar la actividad de APE 1? R: Los sustratos utilizados para analizar nuestras enzimas se describen en la definición de la unidad de cada enzima. APE 1 se analiza utilizando un dúplex de oligonucleótidos de 34 meros que contiene un solo sitio AP.