New England Biolabs, M0288L, ARNasa HII

Categorías relacionadas ARNasas, Análisis del epitranscriptoma Especificación Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para producir una señal de fluorescencia consistente con el corte de 100 picomoles de sustrato de ADN sintético de doble cadena que contiene un único ribonucleótido cerca del extintor de un par fluoróforo/extintor en 30 minutos a 37 °C en tampón ThermoPol 1X. Condiciones de reacción 1X ThermoPol® Reaction Buffer Incubar a 37 °C 1X ThermoPol® Reaction Buffer 20 mM Tris-HCl 10 mM (NH4)2SO4 10 mM KCl 2 mM MgSO4 0,1 % Triton® X-100 (pH 8,8 a 25 °C) Tampón de almacenamiento 20 mM Tris-HCl 100 mM NaCl 1 mM DTT 1 mM EDTA 50 % Glicerol Inactivación por calor Sin unidad Condiciones de ensayo 1X ThermoPol Reaction Buffer con 30 nM de un dsADN sintético de 26 meros que contiene un ribonucleótido interno en un volumen de reacción total de 150 μl. Preguntas frecuentes P: La ARNasa HII no se puede inactivar por calor. ¿Cómo se puede inactivar la ARNasa HII? R: La ARNasa HII se puede inactivar añadiendo SDS a la reacción hasta una concentración final del 0,1 %. P: ¿Qué lado del ribonucleótido corta la ARNasa HII? R: La ARNasa HII corta el extremo 5' de un ribonucleótido dentro del contexto de un dúplex de ADN. Deja un extremo fosfato 5' y un extremo hidroxilo 3'.