New England Biolabs, M0293S, Exonucleasa I (E. coli)

Nota: Consulte también el kit de limpieza rápida de PCR Exo-CIP™ ( Categorías relacionadas Exonucleasas y endonucleasas no específicas Especificación Unidad Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima que catalizará la liberación de 10 nmol de nucleótido soluble en ácido en un volumen de reacción total de 50 μl en 30 minutos a 37 °C en tampón de reacción de exonucleasa I 1X con 0,17 mg/ml de ADN monocatenario [3H]. Condiciones de reacción Tampón de reacción de exonucleasa I 1X Incubar a 37 °C Tampón de reacción de exonucleasa I 1X Glicina-KOH 67 mM MgCl2 10 mM β-ME (pH 9,5 a 25 °C) Concentración de uso 10 000 unidades/ml Tampón de almacenamiento Tris-HCl 10 mM NaCl 5 mM β-ME 0,5 mM EDTA 100 µg/ml BSA 50 % glicerol pH 7,5 a 25 °C Inactivación por calor 80 °C durante 20 minutos Preguntas frecuentes P: ¿Se puede usar la exonucleasa I para eliminar cebadores de las reacciones de amplificación? R: La exonucleasa I degrada el exceso de oligonucleótidos cebadores monocatenarios de una mezcla de reacción que contiene productos bicatenarios. P: ¿Degrada la exonucleasa I el ARN? R: No. P: ¿Se puede usar la exonucleasa I para hacer que el ADN se vuelva romo? R: No. Los extremos cortos no son un sustrato. Utilice la ADN polimerasa I, fragmento grande (Klenow) (NEB n.° M0210) para rellenar los salientes 5' (también llamados extremos cóncavos 3') y reabsorber los salientes 3' o utilice la nucleasa de frijol mungo (NEB n.° M0250) para reabsorber los salientes 3' o 5'. Nota: 3' Los salientes no se pueden rellenar. P: ¿Se puede inactivar la exonucleasa I por calor? R: Sí. Inactivar por calor a 80 °C durante 20 minutos. P: ¿Funciona la exonucleasa I en otros tampones? R: Sí. Para aplicaciones comunes, la exonucleasa I funciona en los tampones NEBuffer 1-4 y en los tampones de polimerasa. P: ¿Se puede usar la exonucleasa I con una exonucleasa bicatenaria para limpiar preparaciones de plásmidos? R: La exonucleasa I se puede usar con la exonucleasa Lambda (NEB n.° M0262) para limpiar preparaciones de plásmidos. La exonucleasa III (NEB n.° M0206) y la exonucleasa T7 (NEB n.° M0263) también funcionan, pero dañan los plásmidos mellados. Aunque se puede usar la exonucleasa I, recomendamos usar la exonucleasa V (RecBCD) (NEB n.° M0345) para eliminar el ADN cromosómico después de la preparación del plásmido. (consulte nuestra Nota de aplicación: Uso de exonucleasa V (RecBCD) para eliminar ADN genómico residual al purificar plásmidos de bajo número de copias con el kit Monarch® Plasmid Miniprep).