New England Biolabs, M0294S, Endonucleasa IV Tth

Categorías relacionadas Enzimas de reparación de ADN y endonucleasas específicas de la estructura Especificación Unidad Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para escindir 1 pmol de un dúplex de oligonucleótidos de 60 meros que contiene un único sitio AP* en un volumen de reacción total de 10 μl en 1 hora a 65 °C. * Un sitio AP se crea tratando 10 pmol de un dúplex de oligonucleótidos de 60 meros que contiene un único residuo de uracilo con 1 unidad de uracil-ADN glicosilasa (UDG) durante 2 minutos a 37 °C. Condiciones de reacción 1X ThermoPol® Reaction Buffer Incubar a 65 °C 1X ThermoPol® Reaction Buffer 20 mM Tris-HCl 10 mM (NH4)2SO4 10 mM KCl 2 mM MgSO4 0,1 % Triton® X-100 (pH 8,8 a 25 °C) Concentración de uso 10 000 unidades/ml Almacenamiento Buffer 10 mM Tris-HCl 100 mM KCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 50 % Glicerol 0,1 % Triton® X-100 pH 7,4 a 25 °C Inactivación por calor Sin unidad Condiciones del ensayo 1X ThermoPol Reaction Buffer que contiene 5 pmol de dúplex de oligonucleótidos marcados con fluorescencia en un volumen de reacción total de 10 μl. Preguntas frecuentes P: ¿Cómo se comporta la Tth Endonuclease IV en PCR? R: La enzima EndoIV Tth puede sobrevivir a los ciclos típicos de PCR. El porcentaje de supervivencia dependerá de las condiciones específicas. Presenta una termoestabilidad significativamente mayor en el tampón ThermoPol que en el tampón Taq estándar, y recomendamos añadir Zn++ (generalmente ZnCl₂) a la reacción hasta 25 micromolar para asegurar la termoestabilidad de las enzimas. No hemos observado que este nivel de Zn++ afecte las reacciones de PCR.