New England Biolabs, M0297S, ARNasa H

La ARNasa H se ha reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.º 10250970. Categorías relacionadas ARNasas,, Análisis del epitranscriptoma,, Síntesis de ADNc y transcriptasas inversas Aplicaciones RT-PCR y síntesis de ADNc,, PCR Especificación Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para producir 1 nmol de ribonucleótidos a partir de 20 picomoles de un híbrido de ARN-ADN de 50 pares de bases marcado con fluorescencia en un volumen de reacción total de 50 μl en 20 minutos a 37 °C. Condiciones de reacción Tampón de reacción 1X RNase H Incubar a 37 °C Tampón de reacción 1X RNase H 50 mM Tris-HCl 75 mM KCl 3 mM MgCl2 10 mM DTT (pH 8,3 a 25 °C) Tampón de almacenamiento 50 mM KCl 10 mM Tris-HCl 0,1 mM EDTA 1 mM DTT 200 µg/ml Albúmina recombinante 50 % Glicerol pH 7,4 a 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 20 minutos Preguntas frecuentes P: Cuando descongelo el tampón de reacción 10X RNase H, veo un precipitado blanco. ¿Qué es y qué debo hacer al respecto? R: El precipitado blanco es DTT en el tampón 10X y se resuspenderá cuando se descongele y se mezcle. El tampón resuspendido es completamente funcional para su uso previsto. P: ¿Es activa la ADN polimerasa I en el tampón ARNasa H? R: Sí. La ADN polimerasa I es activa en el tampón ARNasa H. Sin embargo, para el uso de ambas enzimas en una misma reacción, se recomienda el tampón NEBuffer 2. P: ¿Qué lado de la base del ARN corta la ARNasa H? R: La ARNasa H escinde el enlace 3'-OP del ARN. Genera productos hidroxilo 3' y fosfato 5'. P: ¿Cuál es la actividad de la ARNasa H a 30 °C? R: La actividad de la ARNasa H a 30 °C es de aproximadamente el 90 %.