New England Biolabs, M0298L, Cre Recombinasa

Categorías relacionadas Recombinasas Especificación Unidad Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para producir la máxima recombinación específica de sitio de 0,25 μg de ADN de control pLox2+ en 30 minutos a 37 °C en un volumen total de reacción de 50 μl. La recombinación máxima se determina mediante análisis en gel de agarosa y transformación de las reacciones, seguida de selección en placas de ampicilina. Condiciones de reacción Tampón de reacción de Cre recombinasa 1X Incubar a 37 °C Tampón de reacción de Cre recombinasa 1X NaCl 33 mM Tris-HCl 50 mM MgCl2 10 mM (pH 7,5 a 25 °C) Concentración de uso 1000 - 15 000 unidades/ml Tampón de almacenamiento Tris-HCl 15 mM NaCl 250 mM BSA 0,3 mg/ml Glicerol al 50 % pH 8 a 25 °C Inactivación por calor 70 °C durante 10 minutos Preguntas frecuentes P: ¿Cuál es el peso molecular de Cre recombinasa? R: 38 kD P: ¿Puede usarse Cre recombinasa para linealizar un BAC que contenga un sitio loxP? R: No hemos probado esto aquí, pero el siguiente artículo puede ser útil: Buchholz F, Bishop M. (2001). Biotechniques 31(4):906-918 "Clonación dirigida por LoxP: uso de la Cre recombinasa como enzima de restricción universal." P: ¿Cuál es la secuencia de los sitios loxP en el ADN de control pLox2+ que se utilizará con la Cre recombinasa? R: 5' ATAACTTCGTATAATGTATGCTATACGAAGTTAT 3' (1) (1) Metzger, D. y Feil, R. (1999) Curr. Opin. Biotechnol. 10, 470-476. P: ¿Por qué las bandas del producto de mi mezcla de reacción de Cre recombinasa no son nítidas al analizarla en un gel de agarosa? R: Se recomienda incubar la mezcla de reacción de Cre recombinasa a 70 °C durante 10 minutos antes del análisis en gel de agarosa. Esto ayuda a reducir los artefactos en el gel. P: ¿Se puede utilizar la Cre recombinasa para mover un inserto entre vectores de expresión? R: Sí, si el inserto está en un vector donante y el vector de expresión ha sido diseñado para aceptarlo. Actualmente (10/02), NEB no vende un kit para producir plásmidos donantes y ninguno de nuestros plásmidos ha sido diseñado para aceptar insertos. Consulte con el gerente de producto para obtener información actualizada sobre la ingeniería de plásmidos.